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技术文章
科研界的学子们必须知道的32条ELISA实验秘诀
点击次数：14823 发布时间：2018/3/28 9:51:42
只有不断学习与实验才能逐渐积累经验，做出更好的实验效果。在前面的资讯 内容及技术文章中，上海恒远为大家分享许多elisa试剂盒的操作技巧、要求、方法 等相关技术，我公司技术员根据自身多年ELISA试剂盒实验经验，整理出*新的 ELISA操作技巧。下面我们一起来看下具体内容，科研界的学子们必须知道的32条ELISA实验秘诀 ：
1.加样后及时放人孵箱，标本较多时，要分批操作。按说明步骤严格控制操作 时间，防止孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗彻 底。
2.显色剂尽量在临用前配制，坚持不用过期显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色 剂不用。
3.加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
4.合理安排检测量，以免反应板过多造成洗板等待时间长。
5.液体全部加入酶标孔后，将酶标板放在桌子上平行轻轻摇晃30s，使液体 充分混合均匀，也使其得到充分的反应。
6.洗液不够时，可用蒸馏水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸缓冲液，加入0.1%的 吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。
7.吸取液体时，要用量程和需要量接近的枪去吸，减少误差。
8.要尽量做双孔实验，这样才既能保证数据的准确性，又能反映出试剂盒的精 密度。
9.为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖 或覆膜。
10.未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8℃保存。辣根过氧化物酶标记抗人IgG 工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的辣根过氧化物酶标记抗 人IgG工作液。
11.作时必须戴手套，穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度。
12.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。
13.样品稀释液应用加液器加注，并经常校对其准确性。
14.剩余样品及废弃物应经121℃高压蒸汽灭菌30分钟，或用5.0g/L次氯酸钠等 消毒剂处理30分钟后废弃。
15.不同批号试剂组分不得混用。
16.ELISA试剂盒实验洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗 净。
17.用于检测的样品应保持新鲜。
18.用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管 底。
19.每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是*后加底物溶液 及2N H2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。
20.要确保微量加样器的准确性，可以使用蒸馏水和电子天平进行确定(由于蒸 馏水不含杂质，温度环境为20%左右时，lmL的水可以看作是lg、200 L的水可以看作 是0.2g)每一把微量加样器都应该将其量程和量程进行确定。
21.在使用微量加样器时，吸取不同瓶子中液体后要更换枪头，即使吸取标准品 溶液。
22.吸取液体时速度不易太快，以免产生气泡，吸取的量不够准确。
23.将液体加到酶标孔中时，避免枪头和孔内液体接触，可使枪头上的液滴和孑 L壁接触，液滴会自然流下去。吸入液体时的的方法是吸两档打一档，防止由于 枪头的毛细作用使得部分液体不能流出而造成的误差。
24.吸取液体时要选用量程和需要量接近的微量加样器吸，减少误差。
25.实验前30min将试剂盒中的所有试剂从冰箱取出，使试剂盒中的所有试剂与 提取好的样品溶液的温度相同，酶标板只要取出所需量。
26.由于底物显色剂对光及其敏感，因此要避光保存。
27.手工洗板时每次加入洗涤液后。应静置15～30s，不要将一个酶标孑L中的洗 涤液溅入另一酶标孔中，防止交叉污染。甩去洗涤液后将酶标板放在毛巾或吸水纸 上拍干。
28.检测吸光度前应将酶标仪打开，将其预热30min以上。
29.底物为TMB，避免与皮肤相接触。终止液为2tool的浓硫酸具有腐蚀性，应尽 量避免接触皮肤。
30.孵育的时间应该严格按照试剂盒说明书上的时间为准。
31.对样本的结果有疑问时需要使用其他检测方法进行验证。
32.没有去离子水或双蒸水时，可以使用娃哈哈纯净水配制溶液，切勿使用自来 水。
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原创作者：上海恒远生物技术发展有限公司
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