ELISA试剂盒免疫酶技能与免疫荧光技能

 

    免疫荧光技能虽已广泛应用于免疫学的研讨与诊断，可是荧光抗体染色标本不能长时间保存，对安排细胞的细微结构分辨不清，免疫酶技能则能战胜上述缺乏，符号免疫酶技能的敏感性更优于免疫荧光法，对白腊切片标本尤为适用，为免疫病理研讨拓荒了一条新途径，酶显色商品具有较高的电子密度，通过恰当处理还能够进行免疫电镜调查，免疫酶组化技能分为酶符号法与非符号抗体技能，前者是将酶通过交联剂在抗体分子上，构成酶符号抗体。后者是将酶作为抗原与相应的特异性抗体衔接进行的免疫反响，称为非符号抗体酶技能。

 

    免疫酶技能运用酶催化底物反响的生物扩大作用，进步特异性抗原-抗体免疫学反响查看敏感性的一种符号免疫技能。该技能所用的酶请求纯度高、催化反响的转化率高、专一性强、性质稳定、来历丰厚、报价不贵、制备成的酶标抗体或抗原性质稳定，继续保存着它的活性部分和催化才能。zui好在受检标本中不存在与符号酶一样的酶。别的它的相应底物应易于制备和保存，报价低廉，有色商品易于测定，光吸收高。

 

    ELISA试剂盒固相载体选用免疫酶技能

 

    免疫酶技能的首要试剂为固相的抗原或抗体、酶符号的抗原或抗体和与符号酶直接相关的酶反响底物。可作固相载体的物质许多，zui常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有较强的吸附蛋白质的功能，抗体或蛋白质抗原吸附其上后保存本来的免疫活性。聚苯乙烯为塑料，可制成各种形式，在测定过程中，它作为载体和容器，不参加化学反响，加之它的报价低廉，所以被普遍选用。

 

    聚苯乙烯载体的形状首要有三种：小试管、小珠和微量反响板。小试管的特色是还能兼作反响的容器，zui终放入分光光度计中比色。小珠通常为直径0.6cm的圆球，外表经磨砂处理后吸附面积大添加。如用特别的洗刷器，在洗刷过程中使圆珠翻滚淋洗，作用非常好。zui常用的载体为微量反响板，专用于ELISA测定的商品也称为ELISA板，规范板形是8×12的96孔式。为便于作少数标本的查看，有制成8联或l2联孔条的，放入座架后，大小与规范ELISA板一样。ELISA板的特色是能够同时进行很多标本的查看，并可在特定的比色计上敏捷读出成果。如今已有多种自动化仪器用于微量反响板型的ELISA查看，包含加样、洗刷、保温、比色等过程，对操作的规范化极为有利。

 

    杰出的ELISA板应该是吸附功能好，空白值低，孔底透明度高，各板之间和同一板各孔之间功能附近。聚苯乙烯ELISA板因为配料的不一样和制造技术的不一样，各种商品的质量区别很大。因而每一批号的聚苯乙烯制品在运用前须查看其功能。常用的查看办法为：以必定浓度的人IgG(通常为10ng/ml)包被ELISA板各孔后，每孔内参加恰当稀释的酶标抗人IgG抗体，保温后洗刷，加底物显色，停止酶反响后别离测每孔溶液的吸光度。操控反响条件，使各读数在0.8左右。核算一切读数的均匀值。一切单个读数与均匀读数之差应小于10%.与聚苯乙烯类似的塑料为聚氯乙烯。作为ELISA固相载体，聚氯乙烯板的特色为质软板薄，可切开，价廉、但光洁度不如聚苯乙烯板。聚氯乙烯对蛋白质的吸附功能比聚苯乙烯高，但空白值有时也略高。

 

    ELISA试剂盒为对比不一样固相在某一ELISA测定中的好坏，可用以下办法加以查验：用别的免疫学测定办法选出一个典型的阳性标本和一个典型的阴性标本。将它们别离进行一系列稀释后，在不一样的固相载体上按预订的ELISA操作过程进行测定，然后对比测定成果。在哪一种载体上阳性成果与阴性成果区分zui大，这种载体即是这一ELISA测定的zui合适的固相载体。

 

    除塑料制品外，固相酶免疫测定的载体还有两种资料：一是微孔滤膜，如**纤维素膜、尼龙膜等，这类测定形式将在本章“膜载体的酶免疫测定”中介绍。另一种载体是以含铁的磁性微粒制造的，反响时固相微粒悬浮在溶液中，具有液相反响的速率，反响完毕后用磁铁招引作为别离的手法，洗刷也非常便利，但需装备特别的仪器。