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小鼠骨髓的染色体制备方法步骤
点击次数：15193 发布时间：2019/12/2 9:55:52
染色体制备方法步骤
（1）秋水仙素处理：取骨髓前3h先给小鼠腹腔注入秋水仙素，注射剂量为100μg／kg动物体重。
（2）取骨髓：用损伤脊髓法处死小鼠，然后用剪刀剪开大腿上的皮肤和肌肉，取出大腿骨，用一小块纱布搓干净附在骨上的肌肉碎渣。剪掉股骨两端膨大的关节头，然后用注射器吸取5ml 0.85％生理盐水，插入股骨一端，将骨髓细胞冲洗至10ml的离心管中。可重复冲洗多次，直至骨髓腔呈白色为止。
（3）低渗处理：将所获得的细胞悬浮液以 1000rpm离心10min，吸去上清液，留0.2ml沉淀物，加0.075mol/L KCL 溶液（37℃）至8ml刻度，将细胞沉淀物吹散打匀，在37℃水浴低渗25min。
（4）固定：低渗处理后，立即加入1ml新配制且预冷的固定液，抽打均匀，然后1000 rpm离心10min，弃上清。沿管壁加固定液至6ml， 吹散细胞后静止固定10min，即*次固定。按上述条件离心，去上清液，再次加入固定液至6ml，进行第二次固定。10min后离心吸去上清液，留0.2ml沉淀物，再往沉淀物中滴加4滴固定液，冲匀制成细胞悬液。
（5）滴片：取事先在冰箱中预冷的载玻片，从约15cm高处向每个载玻片上滴1～2滴细胞悬液于粘有冰水的载玻片上，晾干。
（6）染色：取制片平放在玻璃板上，用1∶9 Giemsa染液染色20min，流水冲洗后晾干。
（7）观察：小白鼠染色体的形态特征，并计算2n的染色体数目。
实验原理 小鼠骨髓细胞有高度的分裂活性，并且数量非常多，因此不必进行体外培养，可直接观察到分裂期细胞。处于分裂期的细胞经秋水仙素处理，阻断纺锤丝的形成，使细胞分裂停止于中期，此时染色体达到zui大收缩，具有典型的形态。低渗处理使细胞破裂，便于染色体分散。该方法在临床上多用于白血病的研究，也可用于观察毒性物质对机体遗传物质——染色体损伤的状况。
原创作者：上海恒远生物技术发展有限公司
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