干扰素elisa试剂盒的注意事项：

　　1、试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

　　2、浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

　　3、各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间醉好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

　　4、请每次测定的同时做标准曲线，醉好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请醉后乘以总稀释倍数（×n×5）。

　　5、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　6、底物请避光保存。

　　7、严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。

　　8、所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

　　9、本试剂不同批号组分不得混用。

　　干扰素ELISA试剂盒的操作规程：

　　（1）待测样品孔中每孔加入待测样品100μl，每种样品设3个平行孔；设两个阴性对照孔，每孔加未处理组的细胞裂解液100μl；另设一个空白对照孔，加入纯细胞裂解液100μl。

　　（2）酶标板置4℃，包被过夜。

　　（3）洗板：吸干孔内反应液，用洗涤液过洗一遍（将洗涤液注满板孔后，即甩去），之后将洗涤液注满板孔，浸泡1-2分钟，间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。

　　（4）阴性对照孔每孔加入PBS 50μl，样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl

　　（5）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。

　　（6）洗板，同（4）。

　　（7）每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。

　　（8）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。

　　（9）洗板，同（4）。

　　（10）每孔加TMB显色液 100μl，轻轻混匀10s，置37℃暗处反应15-20min。

　　（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。

　　（12）分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，醉终测得的OD值为两者之差（W1-W2），以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。

　　（13）数据处理：在得出标本（S）和阴性对照（N）的 OD值后，计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。

原创作者：上海恒远生物技术发展有限公司