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技术文章
恒远干货|对ELISA实验结果中显色淡灵敏度偏低问题分析
点击次数：14399 发布时间：2022/4/24 16:59:12
当完成所有实验步骤进行底物TMB溶液显色，发现酶标板中孔的显色比较浅，只有微弱的信号呈现，下面恒远生物来跟大家分析一下可能的原因及解决方法：
1、可能原因：试剂盒未充分平衡
解决方法：试剂盒从2～8℃冰箱取出后打开盒盖，于室温平衡至少20分钟，确保所有试剂已平衡至室温（约25℃）。
2、可能原因：样品不适合做ELISA检测
解决方法：样品一般选择培养上清、血清、血浆。其他样品形式可能不适合做ELISA检测或者需要优化检测的条件（例如稀释液的成分）
3、可能原因：酶标板在贮存或洗后拍干时过分干燥
解决方法：防止板过于干燥。
4、可能原因：包被抗体遭到破坏
解决方法：操作温和，移液枪不能碰到孔底。
5、可能原因：样本和抗体孵育条件不合适
解决方法：按照说明书条件，建议孵育过程中全程振荡孵育。
6、可能原因：洗涤浸泡时间过长
解决方法：按照说明书操作，勿人为增加浸泡时间。
7、可能原因：偶联HRP试剂污染
解决方法：弃去试剂，重新配置。
8、可能原因：错误的稀释偶联HRP试剂
解决方法：弃去试剂，重新配置。
9、可能原因：TMB底物孵育时间过短，因非人为因素影响，需要优化孵育时间
解决方法：确定合适的孵育时间：人为判定-浓度S1出现深蓝色，S4-5有淡蓝色。或机器判定620 nm波长下测定OD值达到0.6-0.65。
10、可能原因：样本浓度过高或存在基质效应
解决方法：建议做不同稀释倍数，确认样本稀释倍数。
11、可能原因：酶标仪滤光片设置有问题或者波长选择不对
解决方法：确认仪器设置及选择正确的波长检测。
12、可能原因：酶标板不适合做ELISA
解决方法：不能使用细胞培养板，建议使用ELISA用高吸附力板子
总结为避免显色淡灵敏度低，需注意以下几点：
1、 常规ELISA试剂盒平衡至30min；
2、 检测抗体、偶联HRP请按说明书稀释比；
3、 样本、抗体孵育条件（温度、转速），请根据说明书；
4、 控制TMB底物显色时间。
由于篇幅有限，详情请“恒远生物”微信公众号或联系我司业务员了解哦！
原创作者：上海恒远生物技术发展有限公司
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