试验原理：

        TNF-β试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知TNF-β浓度的标准品、未知浓度的样品 加入微孔酶标板内进行检测。先将TNF-β和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中TNF-β的浓度呈比例关系。

试剂盒内容及其配制：

自备材料：

1.  蒸馏水。

2.  加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

3.  振荡器及磁力搅拌器等。

4.

样品收集、处理及保存方法：

1、 血清……操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原

和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血红

细胞迅速小心地分离。

2、 血浆……EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。

3、 细胞上清液……1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4、 组织匀浆……将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液。

 5、 保存……如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

操作注意事项：

●   试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

●   实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

●   不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

●   使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

●   使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

●   底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

●   加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

●   按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。