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大鼠糖原磷酸化酶同工酶II
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上海恒远生物公司提供免费代测服务,产品仅供科研专用。
产品名称:大鼠糖原磷酸化酶同工酶II
产品规格:96人份/48人份
主要组成成分:试剂盒
性状:液体
适应症:科研
贮藏:2-8℃
操作步骤
方法一 用于检测未知抗原的双抗体夹心法:
1. 包被:用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。
2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。
3. 加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小时,洗涤。
4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分钟。
5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测O?D值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔O?D值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
方法二 用于检测未知抗体的间接法:
1、用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过夜。
2、次日洗涤3次。加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。同时做空白、阴性及阳性孔对照于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml,37℃孵育30-60分钟,洗涤,一遍用DDW(超纯水)洗涤。其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。
3. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分钟。
4. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
5. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测O?D值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔O?D值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
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