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人雷帕霉素靶蛋白
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品牌名称：$brandModel.Title(进口品牌)型号：人mTOR试剂盒96人份/48人份 原产地：美国 发布时间：2012/2/6 14:12:23更新时间：2024/11/25 9:11:13
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详细内容
产品名称：人雷帕霉素靶蛋白
英文名称：Human mammalian target of rapamyein,mTOR ELISA KIT
性状：液体
适应症：科研
规格：96人份/48人份
贮藏：2-8℃
检测方法：ELISA酶联免疫
产品用途: For laboratory use only,Not for drug or other uses.本公司可提供免费代测服务.
试剂器材
1. 试剂
（1） 包被缓冲液（PH9.6 0.05M碳酸盐缓冲液）:
NaCO31.59克 NaHCO3 2.93克 加蒸馏水至1000ml
（2） 洗涤缓冲液（PH7.4 PBS）：0.15M KH2PO4 0.2克 Na2HPO4?12H2O 2.9克 NaCl 8.0克KCl 0.2克 Tween-20 0.05％ 0.5ml 加蒸馏水至1000ml
（3） 稀释液:牛血清白蛋白（BSA） 0.1克 加洗涤缓冲液至100ml 或以羊血清、兔血清等 血清与洗涤液配成5～10％使用。
（4） 终止液（2M H2SO4）：蒸馏水178.3ml，逐滴加入浓硫酸（98％）21.7ml。
（5） 底物缓冲液（PH5.0磷酸棗柠檬酸）:0.2M Na2HPO4（28.4克／L） 25.7ml 0.1M 柠檬酸（19.2克／L） 24.3ml 加蒸馏水50ml。
（6） TMB（四甲基联苯胺）使用液:TMB（10mg／5ml无水乙醇） 0.5ml底物缓冲液（PH5.5） 10ml0.75％H2O2 32μl
（7） ABTS使用液:ABTS 0.5mg 底物缓冲液（PH5.5） 1ml 3％H2O2 2μl
（8） 抗原、抗体和酶标记抗体。
（9） 正常人血清和阳性对照血清。
2. 器材:
（1） 聚苯乙烯塑料板（简称酶标板）40孔或96孔，ELISA检测仪，50μl及100μl加样器，塑料滴头，小毛巾，洗涤瓶。
（2） 小烧杯、玻璃棒、试管、吸管和量筒等。
（3） 4℃冰箱，37℃孵育箱。
注意事项
1. 正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以实验结果的性。有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。
2. 在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括:
（1） 固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。
（2） 包被抗体（或抗原）的选择：将抗体（或抗原）吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18～24小时。蛋白质包被的*适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg／ml等）进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值而蛋白量*少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg／ml。
（3） 酶标记抗体工作浓度的选择：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定（见酶标记抗体部份）。然后再固定其它条件或采取“方阵法”（包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度）在正式实验系统里地滴定其工作浓度。
（4） 酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体（如OPD等）有潜在的致癌作用，应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入。
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