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Western blotting技术服务
Western blotting技术服务
一、 原理
通过电泳区分不同的组分，并转移至固相支持物，通过特异性试剂（抗体）作为探针，对靶物质进行检测，蛋白质的Western印迹技术结合了凝胶电泳的高分辨率和固相免疫测定的特异敏感等多种特点，可检测到低至1～5ng（可到10－100pg）中等大小的靶蛋白。
二、 应用
1．目的蛋白的表达特性分析
2．目的蛋白与其它蛋白的互作
3．目的蛋白的组织定位
4．目的蛋白的表达量分析
酶联生物为您提供全套免疫印迹技术服务，全部实验皆使用高质量试剂完成。
三、Western 主要操作步骤
1．样本制备及注意事项:
（1）. 悬浮细胞： 取大约 1×107个细胞，低速离心收集，弃去培养液，加入1ml PBS悬浮细胞，转入小离心管中，低速离心沉淀细胞，弃去PBS，放入-70℃ 冰箱保存。干冰运输。
（2）.贴壁细胞：取大约1×107个贴壁细胞，胰酶消化后加入PBS悬浮细胞，低速离心收集，弃去液体，加入 1 ml PBS悬浮细胞，转入小离心管中，低速离心沉淀细胞，弃去PBS，放入-70℃冰箱保存。干冰运输。
（3）.组织：采集新鲜组织（注意：生物体死亡后10分钟内取材料并保存好），组织块以PBS或生理盐水清洗干净，切为小块，放入液氮或-70℃冰箱中保存，干冰运输。
2．蛋白定量
采用BCA蛋白定量试剂盒进行
3．SDS-PAGE电泳
4．蛋白转移到NC膜或PVDF膜
5．膜封闭及抗体孵育
6．ECL显色
采用化学发光检测，经X光胶片曝光显影。图片扫描保存为电脑文件，并用软件得出每个特异性条带的灰度值变化。
7．提供实验报告和胶片
包括详细的实验方法以及实验结果，并将胶片给客户。
服务须知：
1.样本要求：尽可能新鲜；
2.样本量：组织样本，质量大于100mg；细胞样本，细胞数大于1×106；
3.您可自备一抗，也可让我公司代买。为保证质量，抗体为进口单克隆抗体；
4.服务时限和内容：收到样本之日起20-30个工作日内提交实验结果，具体包括实验方法、步骤、所用试剂、仪器、胶片，图片及相关分析数据等；
5.报告送达：实验结果将以电子或书面形式提交给您。
特别提醒：
1.市内细胞样品可直接常温运送，运送时在培养瓶中装满培养液并以封口膜封口，建议冻存后运输。
2.取样和存样所用的冻存管、离心管、吸头等必须高温灭菌；
3.所有存样管口需以封口膜封好。
4.如有特别要求，请与公司销售人员解释清楚
原创作者：上海诺渊实业有限公司
