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RT-PCR 技术服务
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上传时间：2014/2/28 10:23:10
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上 传 者：北京杰辉博高生物技术有限公司
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RT-PCR 技术服务
逆转录聚合酶链反应（Reverse transcription PCR，RT-PCR），是将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，利用变性，退火和延伸多步骤、多循环来扩增目的DN段。在该反应过程中，目的DNA产量呈指数增长，使一些极为微量RNA样品检测成为可能。与其他RNA分析技术如，Northern印迹、RNase保护分析、原位杂交及S1核酸酶等相比，RT-PCR具有更灵敏、便捷、价廉、易于操作等多重优势，已成为初步检测基因转录水平差异变化的实验方法，广泛应用于细胞基因表达、RNA病毒含量测定和克隆特定基因的cDNA序列等诸多方面。
基本步骤：
● 模板制备：RNA抽提。
● 引物合成：客户提供上、下游引物，或者我公司提供免费的引物设计及合成（包括RT-PCR半定量检测中的内参引物）。
● 反转录为cDNA
● PCR扩增
● 产物经琼脂糖电泳后进行灰度扫描分析
服务须知：
1. 您可自备引物，亦可委托我们设计合成（费用由客户承担）。自备引物必须是PAGE纯化的高质量的干粉，我们不接受已溶解的引物。
2. 样本要求：尽可能新鲜
3. 样本量：组织样本，质量≥150mg；细胞样本，细胞数≥1×107。
4. 我公司不接受您提供的RNA样品，除非您有足够的证据证明所提供的RNA没有问题。
5. 服务时限和内容：收到样本之日起20-30个工作日内提交实验结果，具体包括实验方法、步骤、所用试剂、仪器、图片及相关分析数据等；
6.报告送达：实验结果将以电子或书面形式提交给您。
收费标准：80元/个/指标，内参免费；样本数少于5个按5个计；样本量大，可与公司销售人员商议。
样本制备及注意事项:
1. 悬浮细胞： 悬浮细胞培养液倒入离心管中，离心沉淀细胞，弃去上清液。加入1ml PBS悬浮细胞，转入小离心管中，低速离心沉淀细胞，弃去PBS，将细胞沉淀（1×107个细胞）放入-70℃ 冰箱保存。干冰运输。也可以在细胞沉淀中加入1ml的 Trizol 裂解液反复吸打几次，目视可见细胞层溶解完全后，-70℃保存效果更佳。
2. 贴壁细胞：取大约1×107个贴壁细胞，胰酶消化后加入PBS悬浮细胞，低速离心收集，弃去液体，加入 1 ml PBS悬浮细胞，转入小离心管中，低速离心沉淀细胞，弃去PBS，放入-70℃冰箱保存。干冰运输。也可以在细胞沉淀中加入1ml的 Trizol 裂解液反复吸打几次，目视可见细胞层溶解完全后，-70℃保存效果更佳。
3. 组织：采集新鲜组织（注意：生物体死亡后1分钟内取材料并保存好），组织块以PBS或生理盐水清洗干净，切为小块，放入液氮或-70℃冰箱中保存，干冰运输。也可每 50-100 mg 组织加1 ml Trizol溶液匀浆裂解组织样品。匀浆的裂解液4℃ 短期保存（1个月）。-20℃或-70℃长期保存。
特别提醒：
1.因RNA易出现降解，建议将标本加Trizol后运输。
2.实验所需要的取材工具以及组织存放器皿等必须经过无菌无酶高温灭菌处理。
3.取材实验环境要求无RNA酶污染。
4.如有特别要求，请与公司销售人员讲明
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