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技术文章
培养细胞的免疫酶标抗体染色法
点击次数：340 发布时间：2012/5/15 10:43:39
免疫酶组织化学技术是以酶作为抗原抗体反应的标记物，酶催化相应的 底物，形成一种不溶性的反应产物。光镜观察时，要求形成的终产物为不溶性的有色沉淀， 而电镜观察时，则要求酶反应的终产物经适当处理后，具有较高的电子密度。辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）是目前应用*多的酶标记物，具有稳定性强和酶反应特异性高等优点。
1）0．1mol／LPB（pH 7．2）配制的4％多聚甲醛原位固定（4℃）1小时；
2）2％H2O2／甲醇处理（可省略），室温20分钟，封闭内源性过氧化物酶活性；
3）PBS漂洗后1％BSA室温孵育15分钟；
4）特异性抗体（抗体）室温孵育3小时或4℃孵育过夜；
5）PBS充分漂洗后，HRP或生物素标记的第二抗体室温孵育30—60分钟，如系生物素标记的第二抗体，反应后则需进一步按ABC试剂盒要求操作；
6）PBS漂洗后，1％戊二醛0．1m01／LPB配制固定30—60分钟，PBS漂洗；
7）呈色反应：0．03％～0．05％DAB 0．0l％H>（L／0．05mol／LTris—HCl（pH 7．6）显色，适时终止反应，PBS漂洗；
8）1％OsO4后固定30～60分钟；
9）样品的脱水、原位包埋、超薄切片制作及电镜观察等与常规电镜相同。
培养细胞的免疫酶标抗体染色法电镜图
显示胸腺细胞表面：thy1.2抗原分布（箭头所示）
原创作者：上海一基生物科技有限公司
