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庚型肝炎病毒检测
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上传时间：2012/5/24 11:00:38
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上 传 者：上海（一基）实业有限公司
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庚型肝炎病毒（HGV）呈世界性分布，与人类急性和（或）慢性肝炎有关。主要以血液途径传播，如输血及血制品、静脉吸毒、使用污染的注射器、经常接触血源等。HGV为单股正链RNA病毒，基因组全长9 392个核苷酸。基因结构分为：5’非编码区、编码区（结构区和非结构区）、3’非编码区，结构区编码核心蛋白和包膜蛋白，非结构区有NSl、NS2、NS3、NS4、NSs等5个区，其中NS2编码蛋白酶。庚型肝炎病毒（HGV）实验室检测指标主要为HGVAb-IgG。
[测定方法] ELISA法
[方法学原理] 庚型肝炎病毒（HGV）特异性抗原预包被于微孔板条上，样品加入已有样品稀释液的反应孔中，在随后的温育过程中，若样品中含特异性抗体（HGVAb—IgG），则该抗体与包被抗原形成抗原—抗体复合物被吸附到微孔板上，再加入酶标记的第2抗体，*终形成抗原—抗体—酶标记第2抗体复合物，洗涤除去未结合的游离酶，加入显色剂后显色。反之，若样品中不含特异性抗体（HGVAb-IgG），则加入显色剂后不显色。
[标本准备] 静脉抽血2ml，不抗凝。
[试剂]
1．包被反应板
2．样品稀释液
3．阴性对照
4．阳性对照
5．洗涤剂
6．酶标记第2抗体
7．显色剂A、B
8．终止液
[仪器设备] 酶标仪或全自动酶联免疫检测仪。
[测定步骤]
1．用加样器在微孔反应条中加入样品稀释液，每孔100ul。
2．将待测标本各l0ul分别加人已有样品稀释液的各孔中，直接加阴性对照、阳性对照各100u1，设空白对照1孔。
3．充分混匀，37℃环境中温育20min。
4．倾去内容物，用洗涤液洗板5次，确保每次吸净无残留，全部洗完后在吸水纸上用力拍干。
5．各孔加入酶标记第2抗体100fA，振荡混匀。
6．倾去内容物，用洗涤液洗板5次，确保每次吸净无残留，全部洗完后在吸水纸上用力拍干。
7．每孔加入显色剂A、B各1滴，显色10min。
8．终止显色后，在酶标仪上比色（波长为450nm），样品吸光度大于阴性对照2．1倍者为阳性。
[注意事项]
1．试剂盒从冷藏环境中取出时应置室温平衡30min后方可使用，未用完的微孔条用自封袋密封保存，温育酶标板的时间和温度必须严格控制。
2．加液时必须用移液器，并经常校对移液器的准确性。
3．洗涤时各孔均需加满洗涤液，防止孔内有游离酶不能洗净。使用洗板机洗涤应设定30～60s浸泡时间。
4．所有样品和废弃物都应按传染源处理，终止液为2mol／L的硫酸，使用时必须注意安全。
5．操作过程中禁止将预包被微孔板与其他试剂、次氯酸类消毒剂接触。
[正常参考值] HGVAb-IgG阴性
[临床意义] HGVAb-IgG阳性是对HGV进行诊断的重要依据。HGVAb-IgG持续时间较长，具有流行病学调查意义。
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