产品展示
现货供应 T4 DNA连接酶
点击次数：179发布时间：2012/3/5 17:07:09
更新日期：2021/11/24 14:26:07
所 在 地：中国大陆
产品型号：9015-85-4
优质供应
详细内容
| M0094 | T4 DNA连接酶/T4 DNA Ligase | BR，1u/ul | LC200u | 9015-85-4 |
| LC1000u | ||||
| BR，1u/ul,带PEG | LC200u | |||
| LC1000u | ||||
| BR，5u/ul | 200u | |||
| 1000u | ||||
| BR，5u/ul,带PEG | 200u | |||
| 1000u | ||||
| BR，30u/ul | HC1000u | |||
| HC5000u | ||||
| BR，30u/ul,带PEG | HC1000u |
英文名称：T4 DNA Ligase
CAS号：9015-85-4
级别：BR
分子量：55.3kDa，单体
来源：含有T4噬菌体克隆基因30的大肠杆菌
浓度：1u/ul（200CEU/ul）
活性定义：是指在ATP-PPi交换反应中，37℃、30分钟内将1nmol [32PPi]转换为Norit可吸收形式所需的酶量（weiss单位，1个weiss单位相当于约200个粘性末端连接单位。1个粘性末端连接单位：20ul反应体系（50mM Tris-HCL（PH7.5）, 10mM DTT, 10mM MgCL2, 1mM ATP, 25ug/ml BSA, 12uM（300ug/ml）的5-DNA末端）中，在16℃、30分钟内连接50%连接HindIII酶切的Lambda DNA 产物所需的酶量）
酶活性分析混合物：66mM Tris-HCL（PH7.6）, 10mM DTT, 6.6mM MgCL2, 0.066mM ATP, 3.3uM[32PPi]
保存液组分：20mM Tris-HCL（PH7.5）, 50mM KC1, 1mM DTT，0.1mM EDTA和50%（v/v）甘油
10×T4 DNA Ligase缓冲液（#B69）：400mM Tris-HCL, 100mM MgCL2, 100mM DTT, 5mM ATP（PH7.5,25℃）
50% PEG溶液：50%（w/v）聚乙二醇4000
抑制剂：当反应体系中NaC1或KC1的浓度超过200 mM时，可强烈抑制T4 DNA Ligase活性
失活：65℃加热10分钟或70℃加热5分钟
注意：聚乙二醇（PEG）可极大地增加平末端DNA的连接效率，PEG4000在反应体系中的推荐浓度为5%（w/v）；T4 DNA Ligase与DNA结合会改变条带的琼脂糖凝胶电泳迁移率，为避免此现象，电泳前需处理样本或分子量标准。样本处理如下：样本与Fermentas公司6×DNA Loading Dye&SDS溶液（#R1151）混合，75℃加热5分钟或65℃加热10分钟后冰浴保存；转化时，连接产物的体积不得超过感受态细胞体积中的10%；电转化之前，先用抽提方法除去连接混合物中的T4 DNA Ligase，然后经乙醇沉淀纯化抽提产物
质量控制：测试表明无内切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶、磷酸酶污染。功能检测：粘性末端或平末端DNA的连接能力
保存： -20°C
