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间接血凝反应法ELlSA诊断日本血吸虫病
该法是以红细胞为载体的抗原—抗体凝集反应。采用微孔型有机反应板,用冻干血凝抗原、被检血清以生理盐水作1;10、1:20、1:40稀释,每孔加被检血清0.05ml,再加致敏红细胞抗原液l滴振荡,静置40-60min后观察结果。如红细胞呈颗粒凝结,不论是全部或部分均判为阳性。如红细胞沉淀于孔底,也有新的发展。该法为血吸虫免疫诊断的主要方法,与粪检阳性符合率达95%一99%,假阳性为1.3%一3.3%,与其他寄生虫的交叉反应除肺吸虫外均较低。常规ELISA方法在抗原抗体检测中敏感性高,特异性强,但费时,成本高。为此,近年来改进的ELISA有如下几种。
①快速—ELlSA。改进特点为用PVC薄膜代替聚苯乙烯微量反应板作载体;将1%可溶性血吸虫卵抗原与尿素溶解性血吸虫卵抗原等量相混合预吸附于薄膜上。该法主要以目视法判断结果,整个操作流程仅需20min左右。
②斑点—ELlSA(dot-ELISA)是近年新发展的一种ELISA技术,选用对蛋白质有很强吸附能力的硝酸纤维素薄膜作固相载体,底物经酶促反应后形成有色沉淀物使薄膜着色,然后目测或用光密度扫描仪定量。dot-ELISA可用来检测抗体,也可用来检测抗原,由于该法检测抗原时操作较其他免疫学试验简便,故目前多用于抗原检测。
③微波辐射ELISA(MWLELISA)。该法检测全程仅需5min即可加底物显色,判断反应结果。急性期和慢性感染阳性检出率分别达到93%和64%以上(顾启章等,1999)。
④全血快速ELISA。不用分离血清,检测30nfin即可完成。
⑤磁珠—ELISA(MB-ELISA)。以磁珠作为固相载体,检测日本血吸虫的抗原。
⑥Cystatin—ELISA。应用Cystatin捕获血吸虫吐出物中的半胱氨酸蛋白酶,再进行ELISA试验检测日本血吸虫病人血清中相应的特异抗体(黄跃龙等,2002)。