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单克隆抗体的纯化
大量生产单克隆抗体的方法主要有以下两种。
1．体外使用旋转培养管大量培养杂交瘤细胞，从中获取单克隆抗体。但此方法产量低，一般培养液内抗体含量为10—60ug／ml，如果大量生产，费用较高。小鼠可获5一l0ml腹水。也可用注射器抽提腹水。
2．体内接种杂交瘤细胞，制备腹水或血清。
（1）实体瘤法：对数生长期的杂交瘤细胞按（1—3）×107／ml接种于小鼠背部皮下，每处注射o．2ml，共2～4点。待肿瘤达到一定大小后（一般10～20d）则可采血，从血清中获得单克隆抗体的含量可达到1—10rug／m1。但采血量有限。
（2）腹水的制备：常规是先腹腔注射0．5ml降植烷或液体石蜡于BALB／C鼠，1—2周后腹腔注射1X106个杂交瘤细胞，接种细胞7～10d后可产生腹水。密切观察动物的健康状况与腹水征象，待腹水尽可能多而小鼠濒于死亡之前处死小鼠，用滴管将腹水吸人试管，一般一只可反复收集数次。腹水中单克隆抗体含量可达到5—10mg／ml，这是目前*常用的方法。还可将腹水中细胞冻存起来，复苏后转种小鼠腹腔，则产生腹水快、量多。
单克隆抗体的纯化方法同于多克隆抗体，腹水特异性抗体的浓度较抗血清中的多克隆抗体高，纯化效果好。按要求的纯度不同采用相应的纯化方法。一般采用盐析、凝胶过滤和离子交换层析等步骤达到纯化目的，也有采用较简单的酸沉淀方法。目前*有效的单克隆抗体纯化方法为亲和纯化法，多用葡萄球菌A蛋白或抗小鼠球蛋白抗体与载体（*常用Sepharose）交联，制备亲和层析柱将抗体结合后洗脱，回收率可达90％以上。蛋白可与IgGl、IgG2a、IgG2b和IgG3结合，同时还结合少量的IgM。洗脱液中的抗体浓度可用紫外光吸收法粗测，小鼠IgG单克隆抗体溶液A280（A）为1．44吸光单位时相当于lmg／ml。经低pH洗脱后在收集管内预置中和液对保持纯化抗体的活性至关重要。
