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植物赤霉素 (GA) ELISA 检测试剂盒说明书
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上 传 者：上海酶联生物科技有限公司
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植物赤霉素 （GA） ELISA 检测试剂盒
本试剂仅供研究使用
试验原理： 植物赤霉素 （GA） ELISA 检测试剂盒
GA试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知GA浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将GA和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中GA的浓度呈比例关系。
试剂盒内容及其配制： 植物赤霉素 （GA） ELISA 检测试剂盒
试剂盒成份（2-8℃保存） 96孔配置 48孔配置 配制
96/48人份酶标板 1块板（96T） 半块板（48T） 即用型
塑料膜板盖 1块 半块 即用型
标准品：400ng/ml 1瓶（0.6ml） 1瓶（0.3ml） 按说明书进行稀稀
空白对照 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 即用型
标准品稀释缓冲液 1瓶（4.0ml） 1瓶（2.0ml） 即用型
生物素标记的抗GA抗体 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
亲和链酶素-HRP 1瓶（8.0ml） 1瓶（4.0ml） 即用型
洗涤缓冲液 1瓶（20ml） 1瓶（10ml） 按说明书进行稀释
底物A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
终止液 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
标本稀释液 1瓶（12ml） 1瓶（6.0ml） 即用型
自备材料: 植物赤霉素 （GA） ELISA 检测试剂盒
蒸馏水。
加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
振荡器及磁力搅拌器等。
安全性
避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
操作注意事项: 植物赤霉素 （GA） ELISA 检测试剂盒
试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
试剂的准备: 植物赤霉素 （GA） ELISA 检测试剂盒
标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行：
400 ng/ml （6号标准品） 原倍浓度不用稀释直接加入50ul。
200 ng/ml （5号标准品） 100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液
100 ng/ml （4号标准品） 100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液
50 ng/ml （3号标准品） 100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液
25 ng/ml （2号标准品） 100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液
12.5 ng/ml （1号标准品） 100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液
0 ng/ml （空白对照） 原始浓度不用稀释直接加入50ul。
洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。
操作步骤: 植物赤霉素 （GA） ELISA 检测试剂盒
使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。
加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
每孔加入60ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
在450nm波长处测定各孔的OD值。
建议使用的实验方案: 植物赤霉素 （GA） ELISA 检测试剂盒
标准品浓度（ng/ml）
A 400 400 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
B 200 200 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
C 100 100 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
D 50 50 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
E 25 25 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
F 12.5 12.5 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
G 0 0 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
H 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
局限
6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到精确的结果。
试剂盒性能: 植物赤霉素 （GA） ELISA 检测试剂盒
1. 灵敏度：*小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
2. 特异性：不与其它细胞因子反应。
3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。
结 果 判 断 与 分 析: 植物赤霉素 （GA） ELISA 检测试剂盒
1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值
2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的GA标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的GA含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。
3、检测值范围：0-400ng/ml
4、敏感度： 1.0 ng/ml
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