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促销泰乐菌素(Tylosin)酶联免疫分析（ELISA）ELISA试剂盒
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泰乐菌素（Tylosin）酶联免疫分析（ELISA）ELISA试剂盒
本试剂盒仅供研究使用。
泰乐菌素（Tylosin）酶联免疫分析（ELISA）ELISA试剂盒
1 使用目的：
本试剂盒用于饲料、鱼、虾和肉类组织（如鸡、牛肉和猪肉），鸡蛋、蜂蜜、牛奶、血清和尿样中泰乐菌素（Tylosin）残留的定量检测。
泰乐菌素（Tylosin）酶联免疫分析（ELISA）ELISA试剂盒
2 实验原理
本试剂盒采用竞争ELISA方法，在微孔板包被有泰乐菌素（Tylosin）偶联抗原，加入泰乐菌素（Tylosin）标准品或样品，游离泰乐菌素（Tylosin）与微孔条上预包被的泰乐菌素（Tylosin）偶联抗原互相竞争抗泰乐菌素（Tylosin）抗体酶标记物，用TMB底物显色，加入终止液后颜色由蓝色变为黄色，用酶标仪在450nm波长下进行检测，吸光值与样品中泰乐菌素（Tylosin）含量成反比，通过标准曲线计算样品中泰乐菌素（Tylosin）的含量。
3 试剂盒组成
3.1 预包被的泰乐菌素（Tylosin）偶联抗原的可拆酶标板：1块（12孔×8条）。3.2 泰乐菌素（Tylosin）标准品：6瓶（1ml/瓶），含量分别是：0 ppb，0.1ppb,0.3ppb,0.9ppb,2.7ppb,8.1 ppb
3.3抗泰乐菌素（Tylosin）抗体酶结合物：1瓶（6ml）。3.4显色液A：1瓶（6ml）。3.5显色液B：1瓶（6ml）。3.6终止液：1瓶（6ml），2M硫酸。3.7样本稀释液：1瓶（10×, 6ml），用于样品稀释用。3.8浓缩洗涤液：1瓶（20×，20ml），用于洗板。3.9说明书一份。
4 需要而未提供的材料4.1 设备4.1.1波长450nm酶标仪。 4.1.2粉碎机。4.1.3量筒。4.1.4振荡器。4.1.5漏斗。4.1.6Whatman No 1或相当的滤纸。4.1.7微量移液器。4.2 试剂4.2.1去离子水或蒸馏水。4.2.2 甲醇。5 贮存5.1 试剂盒贮存于2~8℃，切勿冷冻5.2 未用完的微孔板应该密封干燥保存6 注意事项6.1 使用试剂盒前请仔细阅读说明书。6.2 不要使用过期试剂盒。6.3 试剂盒使用前，将试剂恢复至室温（25±2℃），建议至少回温2小时。6.4 标准品中含有泰乐菌素（Tylosin），使用时应特别注意，操作时应带手套。6.5 终止液中含有硫酸，使用时防止灼伤皮肤及腐蚀衣物。6.6 不同标准品、样品所用吸头不能混用，否则会影响试验结果。6.7 不同批号试剂盒中的试剂不得混用；不同标准品、样品所用吸头不得混用，否则会影响实验结果。6.8 稀释样本时必须用本试剂盒中的样本稀释液，否则会影响实验结果6.9 混合试剂时应避免起泡。7 工作液准备7.1 泰乐菌素（Tylosin）标准品溶液：0 ppb，0.1ppb,0.3ppb,0.9ppb,2.7ppb,8.1 ppb
7.2 浓缩洗涤液：用蒸馏水按1:20（1+19）稀释备用
7.3 样本稀释液：用蒸馏水按1:10（1+9）稀释备用7.3 显色剂：已备用，避免光线直照7.4 反应终止液：已备用8 样品处理程序（样品在提取过程中，要严格按说明书操作，提取过程中应准确稀释，否则会出现结果不准确，样品应当保存在阴凉避光之处及冷藏保存）8.1.1 牛奶脱脂奶：直接分析。全脂奶：13000g离心15分钟，取上清液检测（避免取到乳脂）8.1.2 肝脏： （稀释倍数2）－－称取2g已绞碎的样品到试管中。－－加入14ml的乙腈，然后均质（用20000rpm均质几分钟）。－－振荡15分钟，然后2500g离心15分钟。－－取上清液1ml到另一玻璃管中在40-50℃下蒸干（利用氮气吹干仪或者旋转蒸发器）。－－加入250μl去离子水并漩涡混合。－－溶液待测。8.1.3 鸡蛋： （稀释倍数2）－－取2g样品到试管中，加入6mL乙腈。－－振荡15分钟，然后3000g离心15分钟。－－取上清液1ml到另一玻璃管中蒸干（40-50℃）。－－加入500μl去离子水并漩涡混合。－－溶液待测。8.1.4 蜂蜜： （稀释倍数2）－－-取蜂蜜2g，置于离心管中（约15mL），加入4mL水溶解。－－加入2ml 乙酸乙脂后，振荡均匀。－－然后3000rpm，离心15分钟。－－取上清液0.5ml置于萃取管中于水浴60℃下以氮气吹干。－－加入0.5ml去离子水混合，振荡约10秒钟。－－取100μl 待测。推荐使用的其它样品的前处理方法：8.2.1 组织样： （稀释倍数1）－－取3g绞碎样品置入50ml离心管中。－－加入6ml乙酸乙酯均质。－－以3000g离心10分钟。－－取2ml上清液置入10ml塞玻璃管中，于水浴50℃下以氮气吹干。－－于此玻璃管中加入2ml正己烷，振荡混合。－－再加入1ml去离子水，振荡混合约10秒钟，以离心机3,000g离心10分钟。－－利用吸管吸去包含中间乳化层部分的上层液（正己烷层）；－－取50μl待测。8.2.2 血清血浆： （稀释倍数1）－－移取1ml血清或血浆至试管中，加2ml乙酸乙酯振荡1分钟。－－室温3000g离心10分钟。－－移取1ml上层的乙酸乙酯至另一试管中，用氮气流60 oC水浴中吹干。－－残留物用0.5ml去离子水溶解。－－取100ul 待测。8.2.3 饲料样品： （稀释倍数4）－－取1g饲料样品（精细粉碎过的，有代表性的），放入离心管中。－－加4ml乙酸乙酯剧烈混合1分钟（用可旋转振荡摇床）－－室温3000g离心10分钟。－－移取1ml上层的乙酸乙酯至另一试管中，60 oC氮气流下蒸干。 －－用1ml异辛烷/氯仿混合物（2:3混合）溶解干燥的残留物。－－加入1ml去离子水强烈振荡1分钟。－－室温3000g离心10分钟。－－取100μl上层水相待测。8.2.4 尿液： （快速处理方法）－－尿液不用处理，直接测定。（如果尿液浑浊，一定要过滤或离心）9 酶免分析步骤9.1 实验须知9.1.1 实验开始前请将所有试剂于盒外充分恢复至室温（25±2℃），时间约2小时。回温至室温（25±2℃）后再取出微孔条，多余的微孔条重新密封立即于2~8℃干燥保存注：一定保证回温充分，否则影响检测的精确度和准确度。9.1.2 使用后请立即将试剂放回2~8℃保存9.1.3 请不要改变分析程序9.1.4 请使用精确的微量移液器9.1.5 操作一旦开始，请不要中断任何程序9.1.6 ELISA结果的可重复性极大程度的取决于操作程序，请严格按照要求操作9.1.7 为避免交叉污染，每个标准品和样品均应使用不同的吸头加样9.1.8 加样时请勿让吸头接触微孔中的溶液或内表面9.2 分析步骤9.2.1 预行编号，标记B0、标准品和样品的位置，推荐进行双孔检测9.2.2 取所需数量的微孔（微孔条可拆），将多余板条重新密封并立即放回2~8℃保存9.2.3 样品稀释液（10×）、浓缩洗涤液（10×）稀释成工作液（蒸馏水或去离子水稀释）9.2.4 在B0孔中加入50µl0.0 ng/ ml标准品溶液9.2.5 在各标准孔中加入50μl的标准品溶液9.2.6 在各样品孔中加入50µl样品溶液9.2.7 在所有孔中加入50µl的抗泰乐菌素（Tylosin）抗体酶结合物9.2.8 轻轻晃动反应板几秒钟。 9.3 37℃温浴30min （温浴过程中不时轻拍反应板，可以减少双孔误差）9.3.1 甩掉孔中液体，用洗液洗涤微孔板5次，*后一次应在吸水纸上拍打以完全除去孔中液体。9.4 反应9.4.1 洗涤程序完成后，立即用微量移液器在每个微孔中先加入50µl显色液A，再加 50µl显色液B；轻微晃动反应板使之彻底混匀9.4.2 37℃温浴10min9.4.3 每孔中加入50µl终止液，混匀9.4.4 在450nm下检测吸光度，结果在5min内读取。10 结果计算10.1定量分析10.1.1所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值（B）除以个标准（0标准）的吸光度值（B0）再乘以100%，即百分吸光度值。B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值B0—0µg/L标准溶液的平均吸光度值10.1.2以泰乐菌素（Tylosin）浓度的对数值为X轴，百分吸光度值为Y轴，绘制标准曲线图。根据样品百分吸光度值，可从曲线上得到对应点的横坐标，即为泰乐菌素（Tylosin）浓度的对数值，求得反对数即为测定液中泰乐菌素（Tylosin）浓度C（ppb）10.1.3由于样品经过了预先稀释，因此根据标准曲线所得出的样品浓度一定要再乘以其稀释倍数。 10.2 半定量测定10.1.1目测半定量测定：首先选择一个适当的标准液与样品同运行，根据样品与标准品吸光度值的高低比较，判断样品浓度值是小于还是大于标准值。10.1.2仪器半定量测定：首先选择一个适当的标准液与样品同运行，根据样品与标准品颜色深浅比较，判断样品浓度值是小于还是大于标准值。
11 特异性物质 交叉反应
泰乐菌素（Tylosin） 100%12 试剂盒参数本试剂盒检测下限为0.05ppbB0吸光度*佳值应大于1.0试剂盒吸光度板内误差小于8％，板间误差小于15％。用本说明书提供的组织样本提取方法回收率大于80％。13 标准曲线模式（仅供参考）试剂盒提供的标准曲线范围为0.1ppb~8.1ppb。
14 分析限制本试剂盒检测为阳性的样品应该用另一种方法如HPLC或GC/MS加以确证。
AB0007-25g AMP;Adenosine-5’-monophosphate, free acid 5’-单磷酸腺苷 [18422-05-4] 25g
AD0016M-5g AMP disodium, hexahydrate ;Adenosine-5’-monophosphate, disodium, hexahydrate 5’-单磷酸腺苷二钠盐六水 [4578-31-8] 5g
AB0013-50g Agarose M 琼脂糖M [9012-36-6] 50g
AB0013-250g Agarose M 琼脂糖M [9012-36-6] 250g
AB0112-100g Azure B 天青B [531-55-5] 100g
AD0016M-25g AMP disodium, hexahydrate ;Adenosine-5’-monophosphate, disodium, hexahydrate 5’-单磷酸腺苷二钠盐六水 [4578-31-8] 25g
AB0020-5g ATP disodium salt, trihydrate; Adenosine 5’-triphosphate, disodium salt, trihydrate 5’-三磷酸腺苷二钠盐三水 [51963-61-2] 5g
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