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免费代测 人水通道蛋白-4 ELISA 检测试剂盒说明书
人水通道蛋白-4 ELISA 检测试剂盒
本试剂仅供研究使用
试验原理：
AQP-4试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知AQP-4浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将AQP-4和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中AQP-4的浓度呈比例关系。
试剂盒内容及其配制
试剂盒成份（2-8℃保存） 96孔配置 48孔配置 配制
96/48人份酶标板 1块板（96T） 半块板（48T） 即用型
塑料膜板盖 1块 半块 即用型
标准品：16ng/ml 1瓶（0.6ml） 1瓶（0.3ml） 按说明书进行稀稀
空白对照 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 即用型
标准品稀释缓冲液 1瓶（4.0ml） 1瓶（2.0ml） 即用型
生物素标记的抗AQP-4抗体 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
亲和链酶素-HRP 1瓶（8.0ml） 1瓶（4.0ml） 即用型
洗涤缓冲液 1瓶（20ml） 1瓶（10ml） 按说明书进行稀释
底物A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
终止液 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
标本稀释液 1瓶（12ml） 1瓶（6.0ml） 即用型
人水通道蛋白-4 ELISA 检测试剂盒自备材料
1． 蒸馏水。
2． 加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3． 振荡器及磁力搅拌器等。
安全性
1． 避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2． 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3． 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
操作注意事项
1． 试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
2． 实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
3． 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4． 使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
5． 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6． 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7． 底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
8． 加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9． 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
样品收集、处理及保存方法
1、 血清－－－－-操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2、 血浆－－－－-EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、 细胞上清液－－-1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、 组织匀浆－－－－-将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液
5、 保存－－－－－－如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
试剂的准备
1． 标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行：
16 ng/ml （6号标准品） 原倍浓度不用稀释直接加入50ul。
8.0 ng/ml （5号标准品） 100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液
4.0 ng/ml （4号标准品） 100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液
2.0 ng/ml （3号标准品） 100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液
1.0 ng/ml （2号标准品） 100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液
0.5 ng/ml （1号标准品） 100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液
0 ng/ml （空白对照） 原始浓度不用稀释直接加入50ul。
2． 洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。
操作步骤
1． 使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2． 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。
3． 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
4． 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5． 每孔加入60ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6． 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7． 每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
8． 取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9． 在450nm波长处测定各孔的OD值。
人水通道蛋白-4 ELISA 检测试剂盒建议使用的实验方案
标准品浓度（ng/ml）
A 16 16 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
B 8.0 8.0 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
C 4.0 4.0 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
D 2.0 2.0 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
E 1.0 1.0 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
F 0.5 0.5 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
G 0 0 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
H 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
局限
6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到精确的结果。
试剂盒性能
1. 灵敏度：*小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
2. 特异性：不与其它细胞因子反应。
3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。
结 果 判 断 与 分 析
1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值
2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的AQP-4标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的AQP-4含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。
3、检测值范围：0-16ng/ml
4、敏感度： 0.01 ng/ml
大鼠BH3结构域凋亡诱导蛋白（Bid）ELISA试剂盒 Rat BH3 interacting domain death agonist,Bid ELISA试剂盒
大鼠胱天蛋白酶9（Casp-9）ELISA试剂盒 Rat Caspase-9,Casp-9 ELISA试剂盒
大鼠阿立新A（Orexin A）ELISA试剂盒 Rat Orexin A ELISA试剂盒
大鼠胱天蛋白酶3（Casp-3）ELISA试剂盒 Rat Caspase 3,Casp-3 ELISA试剂盒
大鼠B细胞淋巴瘤因子2（Bcl-2）ELISA试剂盒 Rat B-cell leukemia/lymphoma 2,Bcl-2 ELISA试剂盒
大鼠CXC趋化因子受体3（CXCR3）ELISA试剂盒 Rat CXC-chemokine receptor 3,CXCR3 ELISA试剂盒
大鼠中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）ELISA试剂盒 Rat neutrophil elastase,NE ELISA试剂盒
大鼠肿瘤特异生长因子/肿瘤相关因子（TGSF）ELISA试剂盒 Rat Tumor Specific Growth Facter/tumor supplied group of factor,TGSF ELISA试剂盒
大鼠羟脯氨酸（Hyp）ELISA试剂盒 Rat hydroxyproline,Hyp ELISA试剂盒
大鼠骨保护素配体（OPGL）ELISA试剂盒 Rat Osteoprotegerin Ligand,OPGL ELISA试剂盒
大鼠乳铁传递蛋白/乳铁蛋白（LF/LTF）ELISA试剂盒 Rat Lactoferrin,LTF/LF ELISA试剂盒
大鼠抗肌内膜抗体IgA（EMA IgA）ELISA试剂盒 Rat anti-Endomysial Antibody IgA,EMA IgA ELISA试剂盒
大鼠铁蛋白（FE）ELISA试剂盒 Rat ferritin,FE ELISA试剂盒
大鼠碳酸酐酶2（CA-2）ELISA试剂盒 Rat carbonic anhydrase 2,CA-2 ELISA试剂盒
大鼠色素上皮衍生因子（PEDF）ELISA试剂盒 Rat pigment epithelium-derived factor,PEDF ELISA试剂盒
大鼠解整合素样金属蛋白酶8（ADAM8）ELISA试剂盒 Rat A Disintegrin And Metalloprotease 8,ADAM8 ELISA试剂盒
大鼠抗胰蛋白酶（AT）ELISA试剂盒 Rat Anti-trypsin,AT ELISA试剂盒
大鼠胰岛细胞抗体（ICA）ELISA试剂盒 Rat islet cell antibody,ICA ELISA试剂盒
大鼠肾损伤分子1（Kim-1）ELISA试剂盒 Rat Kidney injury molecule 1,Kim-1 ELISA试剂盒
大鼠抗单核细胞抗体（AMA）ELISA试剂盒 Rat anti-Monocyte antibody,AMA ELISA试剂盒
大鼠氧化低密度脂蛋白抗体（OLAb）ELISA试剂盒 Rat oxidized lowdensity lipoprotein antibody,OLAb ELISA试剂盒
大鼠抗平滑肌抗体（ASMA）ELISA试剂盒 Rat Anti-Smooth Muscle Antibody,ASMA ELISA试剂盒
大鼠核因子κB亚基p65亲和肽（NF-κB p65）ELISA试剂盒 Rat nuclear factor-κB p65,NF-κB p65 ELISA试剂盒
大鼠纤溶抑制因子/凝血酶激活的纤溶抑制物（TAFI）ELISA试剂盒 Rat Thrombin activatable fibrinolysis inhibitor,TAFI ELISA试剂盒
大鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa（GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61）ELISA试剂盒 Rat platelet membrane glycoprotein ⅡbⅢa,GP-ⅡbⅢa ELISA试剂盒
大鼠游离脂肪酸（FFA）ELISA试剂盒 Rat free fatty acids,FFA ELISA试剂盒
原创作者：上海抚生实业有限公司
