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猫种特异性基因检测试剂盒（荧光PCR法）
点击次数：9发布时间：2022/8/16 13:07:58
更新日期：2022/8/16 13:07:58
所 在 地：
产品型号：
优质供应
详细内容
PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
产品特点：
◇高特异性：与其他病毒无交叉反应，无非特异性扩增；
◇高灵敏度：检测灵敏度可达10~100拷贝；
◇操作简便：该系列所有试剂均采用相同的体系和条件，可同时进行多个检测；
◇高通量：多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。
操作流程:
收集基因信息——>设计引物——>PCR ——>回收目的片段——>与载体连接,取得连接产物 ——> 用感受态细胞做转化 ——>接菌——>阳性克隆(酶切法或PCR)——>质粒抽提——>质粒测序——>测序结果分析——>克隆信息输入数据库——>质粒实物保存。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称 | 规格 | 货号 |
猫种特异性基因检测试剂盒（荧光PCR法） | 50T | FS-01H4115 |
实时荧光定量PCR：
实时荧光定量PCR技术地解决了传统定量只能终点检测的局限，实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度，并记录在电脑软件之中，通过对每个样品Ct值的计算，根据标准曲线获得定量结果。因此，实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的：
1）Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时，刚刚进入真正的指数扩增期（对数期），此时微小误差尚未放大，因此Ct值的重现性同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系，可利用标准曲线对未知样品进行定量测定，因此，实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄今为止定量*，重现性定量方法，已得到的公认，广泛用于基因表达研究、转基因研究，药物疗效考核、病原体检测等诸多领域。
定量PCR方法：
a、竞争法
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中，待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增（其中一个引物为荧光标记）。扩增后用内切酶消化PCR产物，竞争性模板的产物被酶解为两个片段，而待测模板不被酶切，可通过电泳或液相将两种产物分开，分别测定荧光强度，根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
b、内参照法
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物，内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记，下游引物不标记。在模板扩增的同时，内标也被扩增。在PCR产物中，由于内标与靶模板的长度不同，二者的扩增产物可用电泳或液相分离开来，分别测定其荧光强度，以内标为对照定量待检测
使用方法:
一、稀释标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。
1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液，*用带芯枪头，下同）。
3. 在 7 号管中加入 5 μL 阳性对照（浓度为 1×10E8 拷贝/μL，试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备
7. 用自选方法纯化样品的 DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
8. 如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。
三、设置 qPCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），6 个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于PCR 阳性对照。
78246-49-8帕罗汀 规格： 100mg
黄连（三角叶黄连） 规格： 0.5g
4429-63-4甘草 规格： 20mg
表没食子儿茶 规格： HPLC≥98%,10mg/支
53209-27-12”-O-没食子酰基金丝桃 规格： HPLC≥98%;20mg
73590-58-6钠磺酰化物 规格： 5mg
127-22-0蒲公英赛;Taraxerol 规格： 20mg
79165-06-3甘草二铵 规格： 20mg
芹菜 规格： 20mg
75330-75-5汀 规格： 100mg
猫种特异性基因检测试剂盒（荧光PCR法）phospho-CDKN1B/P27kip1 (Thr187) 磷化P27抗体/周期依赖激抑制剂抗体 规格: 0.1ml
Mannan Binding Lectin 结合凝集抗体 规格: 0.2ml
phospho-PP1A/PP2CA (Thr320) 磷化蛋2Cα抗体 规格: 0.1ml
ATP2c1 钙离子ATP通道抗体 规格: 0.2ml
NF66/alpha Internexin α-中连抗体 规格: 0.2mlSTK3 /激3抗体 规格: 0.2ml
phospho-PARK2(Ser378) 磷化帕金抗体 规格: 0.1ml
TSFP1/SP1 转录生因子SP1抗体 规格: 0.1ml
phospho-Ephrin B(Tyr329) 磷化Ephrin B抗体 规格: 0.1ml
phospho-STAT1 (Ser727) 磷化信号转导与转录激活因子1抗体 规格: 0.1mlFAM155A FAM155A抗体 规格: 0.2ml
STK31 /激31抗体 规格: 0.2ml
SFRP1 分泌型卷曲相关1抗体 规格: 0.1mlC11orf74 11号染色体开放阅读框74抗体 规格: 0.2ml
