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ELISA法检测白细胞介素-4
点击次数：244 发布时间：2014/1/12 23:58:03
白细胞介素-4（1L-4）是Th2细胞分泌的一类重要细胞因子，可促进巨噬细胞的黏附，介导IgE的产生，在局部炎性细胞浸润中发挥作用，同时IL-4可使IgE受体表达增强，诱导嗜酸细胞聚集和迁移。
[检测方法] ELISA法
[方法学原理] 在微孔反应板上包被抗人IL-4单克隆抗体，待测标本和标准品中的IL-4会与抗人IL-4单克隆抗体结合，游离的成分被洗去，同时加入生物素化的抗人IL-4抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。生物素与亲和素特异结合，抗人IL-4抗体与结合在单克隆抗体上的人IL-4结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色剂，若反应孑L中有IL-4，HRP会使五色的显色剂呈现蓝色，加终止液变黄色。在波长450nm处测吸光度，IL-4浓度与吸光度成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中的IL-4浓度。
[标本准备] 静脉血2ml，不抗凝。
[试剂]
1.预包被微孔反应板
2.浓缩酶结合物
3.酶结合物稀释液
4.标准晶和标本稀释液
5.浓缩生物素化抗体
6.IL-4标准品
7.浓缩洗涤液
8.显色剂A、B
9.终止液
[仪器] 酶标仪或全自动酶联免疫检测仪。
[检测步骤]
1.在微孔反应板相应孔中分别加入待测样本、不同浓度标准品100ul，再加生物素化抗体.工作液50ul。
2.振荡混匀，置20~25℃环境中温育120min。
3.将孔内液体吸干，用洗涤液充分洗涤5次，干燥。
4.除空白孔外，加入酶结合物工作液100ul。
5.振荡混匀，置20~25℃环境中温育30min。
6.将孔内液体吸干，用洗涤液充分洗涤5次，干燥。
7.每孔加入显色剂A、B各50fA，轻轻振荡混匀，37℃环境中避光显色10min。
8.加入终止液50tA后，轻轻振荡混匀。用酶标仪（450nm波长）测定各孔吸光度，与标准曲线对照，求出IL-4水平。
[正常参考值] 务实验室可根据检测方法的不同确立正常参考值范围。
[注意事项]
1.试剂盒从冷藏环境中取出时应在室温环境中平衡30min后方可使用，未用完的微孔条用自封袋密封保存。
2.酶标板洗涤时各孔均需加满洗涤液，防止孔内有游离酶不能洗净。应设定30—60s的洗涤浸泡时间。
3.滴加试剂前应将滴瓶翻转数次，使液体混匀。滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确（注意:勿将试剂滴在孔壁上）。
4.所有样品和废弃物都应按传染源处理。终止液为2mol/L硫酸，使用时应注意安全。
5.每批样本应同时做标准曲线。
6.若标本OD值在标准曲线测定范围以外，应适当稀释后重测。
[临床意义] IL-4能促使静止的B细胞表达MHC亚类分子，增强淋巴细胞的抗原呈递能力，增强巨噬细胞的吞噬功能，而且对淋巴细胞的迁移也具有一定意义。
原创作者：上海继锦化学科技有限公司
