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【产品名称】
通用名称：猪伪狂犬病毒gE 抗体（IgG）诊断试剂盒（酶联免疫法）
英文名称：Swine Pseudorabies Virus gE Antibody Test Kit （ELISA）, gE Ab
【包装规格】
96×2 测试/盒
【预期用途】
本试剂盒用于定性测定猪血清中伪狂犬病毒gE 蛋白的IgG 抗体。用于区别临床野毒感染产生的抗体和
用gE 基因缺失疫苗免疫产生的抗体、感染猪的血清学诊断以及猪伪狂犬病毒病的流行病学调查。
【检验原理】
本试剂盒应用固相酶联免疫吸附试验（ELISA）原理，由包被有高纯度的gE 蛋白的微孔反应板、辣根
过氧化物酶标记的抗猪IgG 及其它试剂配套组成。其反应机理为包被抗原与样本中的gE-IgG 结合，再与酶
标抗猪IgG 抗体形成“包被抗原+gE-IgG+酶标抗猪IgG 抗体”复合物，加入显色剂，通过酶催化反应显色。
显色深浅与gE-IgG 的量成正比，当显色超过设定的临介值时结果判为阳性，表明猪有自然感染。
【主要组成成份】
1． gE 抗原包被板96T×2 块包被有gE 蛋白抗原
2． 酶标记物（黄盖） 22ml×1 瓶含辣根过氧化物酶标记的抗猪IgG 抗体
3． 样本稀释液（透明盖） 25ml×1 瓶主要成份为0.01M PBS 缓冲液
4． 浓缩洗涤液（20×）（白盖） 50ml×1 瓶PBST 缓冲液，用前用去离子水20 倍稀释
5． gE-IgG 阴性对照血清（绿盖） 1.5ml×1 瓶主要成份为gE-IgG 阴性血清
6． gE-IgG 阳性对照血清（红盖） 1.5ml×1 瓶主要成份为gE-IgG 阳性血清
7． 显色剂A（紫盖） 12ml×1 瓶主要成份为过氧化脲
8． 显色剂B（黄盖） 12ml×1 瓶主要成份为TMB
9． 终止液（蓝盖） 12ml×1 瓶主要成份为H2SO4
10． 盖板膜6 张
11． 说明书1 份
不同批号的试剂组份不可混用。
【储存条件及有效期】
于2℃～8℃避光保存，防止冷冻，有效期6 个月。
【适用仪器】
1．酶标仪，单波长450nm 测量或双波长450/630nm 测量。
2．ELISA 用洗板机。
3．微量移液器。
4．水浴箱或恒温箱。
5．微量振荡器。
【样本要求】
1．本试剂检测的样本为猪血清，样本应无菌采集，2℃～8℃贮存不超过一周，长期应在-20℃以下保存。
2．避免使用严重溶血、有沉淀物、含悬浮纤维蛋白及污染长菌的样本。
3．样本中含有常规用量的EDTA、枸橼酸钠或肝素钠等抗凝剂不影响本实验。
【检验方法】
1．加样：根据样本数量，取所需板条。单波长检测时，需设空白对照1 孔（不加任何液体）；双波长检测
时，不设空白对照孔。设阴、阳性对照各2 孔，分别加入不稀释的阴、阳性对照血清100μl 于相
应孔中。其余为样本孔，每孔加100μl 样本稀释液，再分别加入样本10μl（加入样本后颜色会有
变化）。
2．温育：加好样后振荡10 秒，充分混匀，置37℃温育30 分钟。
3．洗板：甩去孔内液体，用洗涤液（浓缩洗涤液用去离子水以20 倍稀释）注满反应板孔，洗涤5 次，每
次停留1 分钟，*后一次洗后拍干。
4．加酶：每孔加酶标记物100μl，注意：空白孔不加酶标记物，也不加其他任何液体。
5．温育：置37℃温育30 分钟。
6．洗板：同上洗涤。
7．显色：每孔加显色剂A、B 各50μl，振荡混匀，37℃避光反应15分钟。
8．终止：每孔加终止液50μl，振荡10 秒，充分混匀。终止后5～30 分钟内读数。
9．读数：单波长检测时，酶标仪检测波长为450nm，以空白孔调零，读取各孔吸光度值（A 值）；双波长
检测时，以450nm 为主波长、630nm 为参比波长，读取各孔吸光度值（A 值）。注意：单波长检
测时，若酶标仪读数前没有以空白孔调零，则所得的结果均应减去空白孔A 值再做计算和判定。
10．结果判定：
临界值（CO.）= 0.15。
样本A 值（S）/临界值（CO.）≥1，判定为gE-IgG 阳性； S/CO.＜1，判定为gE-IgG 阴性。
阴性对照血清A 值应小于0.10，阳性对照血清A 值应大于0.70，否则试验不成立，需重新试验。注意：
单波长检测时，若酶标仪读数前没有以空白孔调零，则阴阳性对照血清A 值均应减去空白孔A 值再做判定。
【参考值（参考范围）】
未自然感染猪伪狂犬病毒的健康猪群为阴性，S/CO.＜1。
【检验结果的解释】
1．严重溶血、血清中纤维蛋白分离不充分、含红血球、有沉淀物、长菌的样本可能导致假阳性。
2．阳性结果用于感染猪的血清学诊断以及流行病学调查时需结合其他方法和临床资料进行。
【产品性能指标】
1．特异性以本品检测30 份阴性参比血清不出假阳性。
2．敏感性以本品检测30 份阳性参比血清不出现阴性。
3．精密性用精密性参比品测定，CV（%）不高于15%（n=10）。
4．稳定性试剂盒在2℃～8℃放置6 个月或37℃放置3 天，检定结果达到以上1-3 标准。
【注意事项】
1．本试剂盒仅用于体外诊断。
2．本试剂盒应按含有传染性材料对待，操作时需戴手套穿工作衣。
3．实验废弃物应经121℃高压蒸汽灭菌30 分钟，或用5.0g/L 次氯酸钠等消毒剂处理30 分钟后废弃。
4．微孔板从冷藏环境中取出时应在室温中平衡至潮气干尽后方可拆开，未用完的微孔板须放回有干燥剂的
铝箔袋并密封4℃保存。未用完的液体试剂应盖好瓶盖，与其它配套组份放入试剂盒中于2℃-8℃避光
保存。
5．若20 倍浓缩洗涤液出现结晶，属正常现象，放置37℃至溶解后即可。
6．应用微量移液器加入样本及试剂，并经常校对其准确性。
7．加洗涤液时应做到满而不溢，防止孔口有游离酶不能洗净或各孔间的交叉污染。
8．终止液有腐蚀性，若溅到皮肤或衣物上应立即用大量清水冲洗干净。
 

原创作者：上海继锦化学科技有限公司