企业档案
- 会员类型：免费会员
- 工商认证： 【未认证】
- 最后认证时间：
- 法人：
- 注册号：****
- 企业类型：生产商
- 注册资金：人民币万
酶联免疫吸附测定试剂盒(ELISA KIT)
- 人类科研用ELISA KIT
- 小鼠科研用ELISA KIT
- 大鼠科研用ELISA KIT
- 兔子科研用ELISA KIT
- 豚鼠科研用ELISA KIT
- 绵羊科研用ELISA KIT
- 猫科研用ELISA KIT
- 犬科研用ELISA KIT
- 鸭科研用ELISA KIT
- 鸡科研用ELISA KIT
- 羊科研用ELISA KIT
- 牛科研用ELISA KIT
- 猴科研用ELISA KIT
- 猪科研用ELISA KIT
- 水产科研用ELISA KIT
- 马科研用ELISA KIT
- 植物科研用ELISA KIT
- 食品安全检测ELISA KIT
- 药物残留ELISA KIT
- 动物疫病诊断ELISA试剂盒
细胞因子
抗体
标准品
细胞株
化学试剂
实验室仪器
实验室耗材
联系我们
联系人：黄先生
热门标签
技术文章
大鼠蛋白激酶B（PKB）ELISA试剂盒使用说明书
点击次数：202 发布时间：2012/4/18 22:52:21
联系电话：021-34535391,15900443528，QQ:1162650610
进入该公司展台：http://www.app17.com/C63416/
本试剂盒仅供研究使用。产品名称：
通用名：大鼠蛋白激酶B（PKB）酶联免疫分析试剂盒
使用目的：
本试剂盒用于测定大鼠血清，血浆及相关液体样本中蛋白激酶B（PKB）含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠蛋白激酶B（PKB）水平。用纯化的大鼠蛋白激酶B（PKB）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入蛋白激酶B（PKB），再与HRP标记的PKB抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的蛋白激酶B（PKB）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人大鼠蛋白激酶B（PKB）浓度。
试剂盒组成
| 1 | 20倍浓缩洗涤液 | 30ml×1瓶 | 7 | 终止液 | 6ml×1瓶 |
| 2 | 酶标试剂 | 6ml×1瓶 | 8 | 标准品（270nmol/L） | 0.5ml×1瓶 |
| 3 | 酶标包被板 | 12孔×8条 | 9 | 标准品稀释液 | 1.5ml×1瓶 |
| 4 | 样品稀释液 | 6ml×1瓶 | 10 | 说明书 | 1份 |
| 5 | 显色剂A液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2张 |
| 6 | 显色剂B液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1个 |
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在、第二孔中分别加标准品100μl，然后在、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为180nmol/L，120nmol/L ，60nmol/L，30nmol/L，15nmol/L）。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品*终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4． 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请*后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
检测范围：
10nmol/L -200nmol/L
规格：
96人份/盒
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月
原创作者：上海继锦化学科技有限公司
