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【产品简介】

新城疫（Newcastle disease,ND）又名为鸡瘟，是目前危害我过养殖业的主要禽流感业的主要禽流感传染病，主要侵害鸡，火鸡，其他禽类和野鸡类，引起呼气道感染及免疫抑制，多年来一直在各类禽类群中广泛存在，虽然有疫苗进行免疫接种，但免疫鸡群仍然发病，给养禽业造成了巨大损失。

【使用意义】

①本产品用于鸡血清抗体的检测，以确定被检鸡是否感染过鸡新城疫病毒或免疫鸡体内抗体水平。

②评估鸡群感染ND的风险程度。

③了解雏鸡母源抗体水平，为ND免疫程序的制定提供参考。

【检测原理】

本品系由包被新城疫病毒的微孔板和酶标记抗鸡IgG及其他试剂组成，应用酶免间接法原理（ELISA）检测鸡血清或血浆中新城疫病毒IgG抗体。

【试剂盒组成】

1.	鸡传染性支气管炎病毒抗原包被微孔板条	96T×1
2.	酶标记物	11ml×1
3.	样品稀释液	20ml×1
4.	显色剂A	7 ml×1
5.	显色剂B	7 ml×1
6.	洗涤液（用前1：25稀释）	10 ml×2
7.	抗体阳性对照血清	0.6 ml×1
8.	抗体阴性对照血清	0.6 ml×1
9.	终止液	7 ml×1
10.	封板膜	3
11.	密封袋	1个
12.	说明书	1份

【使用方法】

1.     使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。

2.     取所需用量包被微孔板条，设空白、阴性及阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。

3.     阴性、阳性对照孔分别加阴性、阳性对照血清100μl；空白对照孔不加；样品稀释，血清每孔样本先1：50稀释后加100μl；蛋黄以1:100稀释后每孔加100ul。

4.     混匀，置37℃温浴30分钟。

5.     扣去孔内液体，每孔加满洗涤液，静置60秒后弃去，重复洗涤5次，拍干。

6.     每孔加酶标记物100μl（空白孔除外）。

7.     置37℃温浴30分钟。

8.     洗涤，同步骤5。

9.     每孔依次加显色剂A、显色剂B各50μl，混匀，37℃避光反应10分钟。

10. 每孔加终止液50μl，混匀，置酶标仪450nm处测各孔A值（建议用双波长450nm、630nm）。

【结果判定】

1.     阴性对照：正常情况下，阴性对照孔A值≤0.1；

2.     阳性对照：正常情况下，阳性对照孔A值≥0.4；

3.     结果判定：

3.1 未曾免疫

临界值（C.O.）的计算：临界值=0.15+阴性对照孔均值；检测标本A₄₅₀值≥临界值判定为本试验阳性；检测标本A₄₅₀值＜临界值判定为阴性。所有阴性、阳性对照和样品的A值均须减去空白平均值后作为计算值；阴性对照孔A值大于0.10时应舍弃，如所有阴性对照孔A值都大于0.10时须重复实验；阴性对照孔低于0.05时以0.05计算。

3.2 免疫鸡群

检测样本A₄₅₀值≥0.45即血凝滴度≥6log2时有很好的保护；

0.45> A₄₅₀≥0.2时相应血凝滴度为5log2；

0.3> A₄₅₀≥0.2时相应血凝滴度为4log2，有一定保护力；

当A₄₅₀≤0.3时，建议加强免疫。

【注意事项】

1.     操作时必须戴手套，穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度。

2.     试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。

3.     样品稀释液应用加液器加注，并经常校对其准确性。

4.     洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净。

5.     所有样品洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

6.     微孔板从冷藏环境中取出时应在室温中平衡至潮气干尽后方可，未用完的微孔板须放入有干燥剂的密封袋中保存。

7.     用于检测的样品应保持新鲜。

8.     剩余样品及废弃物应经121℃高压蒸汽灭菌30分钟，或用5.0g/L次氯酸钠等消毒剂处理30分钟后废弃。

9.     不同批号试剂组分不得混用。

【保存与有效期】

于2～8℃避光保存，有效期自成品检定合格之日起为12个月。

原创作者：上海继锦化学科技有限公司