鸡马立克氏病病毒琼脂扩散试验抗原与阴、阳性血清-北京康农兴牧-张经理壹叁柒壹柒柒柒壹柒柒陆同微信

一、原理 抗原、抗体在琼脂糖凝胶中可以自由扩散，当抗原、抗体在比例适当处结合为抗原－－抗体复合物，形成沉淀线。
二、适用范围
1. 抗原主要用于检测鸡群接种马立克氏病后血清抗体。
2. 标准阳性血清主要用于检测马立克氏病病毒。
三、实验器材琼脂糖板、马立克氏病琼扩抗原、标准阳性血清、被检血清、打孔器、微量移液器等。
四、实验方法
1. 琼脂糖平板配制：取0.01M PH7.4 PBS 100毫升，加入优质琼脂糖1克，氯化钠8克，在水浴中加热融化，加1%迭氮钠1毫升，混匀。将无菌平皿（直径9厘米）置水平台上，每个平皿倒入融化的琼脂糖约15-20毫升，使其厚度为2.5-3毫米。注意倾倒时勿产生气泡，置4℃冰箱中保存备用。
2. 用抗原测血清
1） 打孔：在琼脂糖板上用直径4-6mm的打孔器打孔，孔间距为3mm。 1） 封底：将孔中琼脂糖挑出后，将平皿底部置80－－90℃水浴旋转数秒钟，或放在酒精灯上微微加热，使孔底琼脂糖稍稍融化而封底。
2） 加样：用微量移液器在中央孔加入已知的马立克氏病诊断抗原，外周孔加入标准阳性血清及被检血清或卵黄（用生理盐水稀释）。置37℃湿盒中24—72h，每天观察一次，72h判定结果。
3）　结果判定：抗原与标准阳性血清间出现明显的沉淀线后，如被检血清与抗原间亦出现沉淀线且与对照沉淀线相交连时，则为阳性，否则为阴性。
3. 用血清测马立克氏病病毒
1）. 在中间孔加入马立克氏病标准阳性血清。
2）. 周围孔加马立克氏病抗原和马立克氏病病毒，其它步骤同上。
五、物理性状：
1. 呈黄褐色液体。
2. -10℃~ -20℃为液体；-30℃以下有时冻结，但不影响效果。
六、注意事项
1. 抗原使用前先摇匀。
2. 被检血清要新鲜，出现沉淀、混浊或腐败者不能使用，避免阳光照射。
3. 滴加抗原或血清时，勿溢出孔外或渗入盘底。
4. 琼脂糖板应放4℃冰箱中充分冷却后，再打孔为佳。
七、保存 于-10℃以下保存一年。
 

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