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植物查尔酮合成酶(CHS)酶联免疫分析(ELISA)活性说明书

点击次数:398 发布时间:2016/7/28
 植物查尔酮合成酶(CHS酶联免疫分析(ELISA

试剂盒使用说明书

本试剂仅供研究使用       目的:本试剂盒用于测定植物组织,细胞及其它相关样本中植物查尔酮合成酶(CHS)活性。

实验原理

   本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本植物查尔酮合成酶(CHS水平。用纯化的植物查尔酮合成酶(CHS抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入植物查尔酮合成酶(CHS抗原,再与HRP标记的CHS抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后底物TMB显色。TMBHRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的植物查尔酮合成酶(CHS呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品植物查尔酮合成酶(CHS)活性浓度。

 

试剂盒组成

试剂盒组成

48孔配置

96孔配置

保存

说明书

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶标包被板

1×48

1×96

2-8℃保存

标准品:1800IU/L

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃保存

标准品稀释液

1.5ml×1

1.5ml×1

2-8℃保存

酶标试剂

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

样品稀释液

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

显色剂A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

显色剂B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

终止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃保存

浓缩洗涤液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃保存

 

标本要求: 

1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但避免反复冻融

2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

 

操作步骤:

1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在、第二孔中分别加标准品100μl,然后在、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为1200IU/L800IU/L ,400IU/L200IU/L100IU/L)。

2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品*终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀

3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟

4. 配液:将3048T20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水3048T20倍)倍稀释后备用。

5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外

7. 温育:操作同3

8. 洗涤:操作同5

9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟. 

10. 终止:每孔加终止50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)

11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值) 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

 

注意事项:

1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4. 请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请*后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6. 底物请避光保存。

7. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9. 本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

 大鼠17羟皮质类固醇(17-OHCS)elisa试剂盒96T/48T

大鼠17羟孕酮(17-OHP)elisa试剂盒96T/48T

大鼠17-酮类固醇(17-KS)ELISA试剂盒96T/48T

大鼠25羟维生素D3(25(OH)D3/25HVD3)ELISA试剂盒 96T/48T

大鼠26S蛋白酶体(26SPSM)ELISA试剂盒96T/48T

大鼠5核苷酸酶(5-NT)ELISA试剂盒96T/48T

大鼠5羟色胺(5-HT)ELISA试剂盒96T/48T

大鼠6酮前列腺素(6-K-PG)ELISA试剂盒96T/48T

大鼠6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)ELISA试剂盒96T/48T

大鼠8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)ELISA试剂盒96T/48T

大鼠8异前列腺素(8-iso-PG)ELISA试剂盒96T/48T

大鼠Ⅰ型胶原(ColⅠ)ELISA试剂盒96T/48T

大鼠Ⅰ型胶原N末端肽(NTX)ELISA试剂盒96T/48T

大鼠Ⅰ型前胶原C末端肽(CⅠCP)ELISA试剂盒96T/48T

大鼠Ⅰ型前胶原羧基端肽(PⅠCP)ELISA试剂盒96T/48T

大鼠Ⅱ型胶原(ColⅡ)ELISA试剂盒96T/48T

大鼠Ⅲ型胶原(ColⅢ)ELISA试剂盒96T/48T

大鼠Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢNT)ELISA试剂盒96T/48T

大鼠Ⅲ型前胶原肽(PⅢNP)ELISA试剂盒96T/48T

大鼠Ⅳ型胶原(ColⅣ)ELISA试剂盒96T/48T

大鼠apelin12(AP12)ELISA试剂盒96T/48T

大鼠BH3结构域凋亡诱导蛋白(Bid)ELISA试剂盒96T/48T

大鼠B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)ELISA试剂盒96T/48T

大鼠B因子(BF)ELISA试剂盒96T/48T

大鼠CXC趋化因子配体16(CXCL16)ELISA试剂盒96T/48T

大鼠CXC趋化因子受体3(CXCR3)ELISA试剂盒96T/48T

大鼠C反应蛋白(CRP)ELISA试剂盒96T/48T

 

 

 

 

 

 

 

    

 

 

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