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Invitrogen 原装脂质体3000
点击次数：96发布时间：2023/8/23 15:51:10
更新日期：2024/9/10 17:12:55
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详细内容
Invitrogen 原装脂质体3000操作说明：
从组织中提取总RNA
1)液氮研磨，组织块直接放入研体中，加入少量液氮，迅速研磨，待组织变软，再加少量液氮，再研磨，如此三次，按50-100mg组织/mlTrizol加入Trizol，转移入离心管进行第2步操作。
2) 匀浆：组织样品按50-100mg/mlTrizol 加入Trizol，另外，组织体积不能超过Trizol体积的10%，否则匀浆效果会不好，用电动匀浆器充分匀浆约需1-2分钟。从细胞中提取总RNA 。
1) 培养贴壁细胞：不须消化，可直接用Trizol进行消化、裂解，Trizol体积按10cm2/ml比例加入。
2) 悬浮细胞可直接收集、裂解，每1ml Trizol可裂解5×106动物、植物或酵母细胞，或107细菌细胞。
2．细胞或组织加Trizol后，室温放置5min，使其充分裂解。注：此时可放入-70℃长期保持。
3．12000rpm 离心5min，弃沉淀。
4．按200ul/ml Trizol加入，振荡混匀15分钟，室温放置15min。注：禁用漩涡振荡器， 以免基因组DNA断裂。
5．4℃12000g离心15min。
6．吸取上层水相，至另一离心管中。
注：
1）Invitrogen 原装脂质体3000千万不要吸取中间界面。
2)若同时提取DNA和蛋白质，则保留下层酚相存于4℃冰箱,若只提RNA，则弃下层酚相。
7．按0.5ml异丙醇/ml Trizol 加入异丙醇混匀，室温放置5-10min。
8．4℃ 12000g离心10min，弃上清，RNA沉于管底。
9．按1ml 75%乙醇/ml Trizol加入75%乙醇，温和振荡离心管，悬浮沉淀。
10．4℃ 8000g离心5min，尽量弃上清。
11．室温晾干或真空干燥5-10min。注：RNA样品不要过于干燥，否则很难溶解。
12．可用50ul H2O，TE buffer或0.5%SDS溶解RNA样品，55-60℃5-10min。 注：H2O、TE或0.5%SDS均须用DEPC处理并高压。 12、测O.D值定量DNA浓度。
注：
1）此方法提取RNA A260/A280值在1.6-1.8之间。
2) 产率估计：组织标本：（ug RNA/mg组织）1-10ug，培养细胞（ug RNA/106 Cell）：5-15ug。
注：
1、组织或细胞量过少，可酌情减少Trizol用量。
2、组织或细胞用量过多，会引起DNA对RNA的污染。
3、高蛋白，脂肪或多糖类组织，肌肉组织或块状植物组织等，组织匀浆或液氮研磨 后须4℃ 1200离心10min去掉不溶物，再进行下面操作，若顶层有脂肪物，则 也须去掉。
4、热天提RNA，带手套是必须的，手是RNase的主要来源。
5、组织块用液氮研磨，效果，若没有液氮或电动匀浆器，可用手动匀浆器代替，此时组织块不宜过大，且需先用眼科剪将组织绞碎，然后再充分研磨。
