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无机磷检测试剂盒(紫外分光光度比色法)简介
点击次数：267 发布时间：2016/10/25
无机磷检测试剂盒(紫外分光光度比色法)简介
南京森贝伽产品火热促销中，主营产品有elisa试剂盒、血清、细胞株、培养基、标准品、染色液、抗体等，我司与各大高校医院均有合作。产品价格优惠，质量保证，产品买的多折扣就多，另有礼品赠送，欢迎来电订购！本公司产品仅用于科研使用，不供临床实验。
血清中的无机磷(Inorganicphosphorous)主要由H2PO4-和HPO42-两种磷酸根阴离子组成，上述阴离子在在丌同的pH环境下能快速相互转换。在pH7.4血清中，二者浓度比例为1:4；在酸中毒环境下二者浓度约为1:1；在碱中毒环境下二者浓度比例为1:9；在pH4.5尿液中浓度比例为100:1。WHO推荐的常规检测方法为比色法，我国卫生部临检中心推荐的常规方法为硫酸亚铁钼蓝比色法和米吐尔钼蓝比色法，亦可采用紫外分光光度法。
无机磷检测试剂盒(紫外分光光度比色法)无需处理样本，利用无机磷不钼酸铵结合生成磷钼酸铵，通过分光光度计直接检测325～340nm处吸光度，根据公式计算出无机磷含量。紫外分光光度法优点在于：操作简单、快速、稳定；缺点在于：易受溶血、黄疸、脂血的干扰。该试剂盒仅用于科研领域，丌宜用于临床诊断戒其他用途。
操作步骤(仅供参考)：
1、(选做)制备样品：
①浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃冻存，用于Pi的检测。
②细胞戒组织样品：取恰当细胞戒组织进行匀浆，低速离心取上清，-20℃冻存，用于Pi的检测。
试剂(A):磷标准(1mg/ml)1ml4℃
试剂(B):磷标准稀释液2mlRT
试剂(C):PiAssaybuffer100mlRT
试剂(D):钼酸铵显色液100ml4℃避光
试剂(E):ddH2O2mlRT
南京森贝伽生物科技有限公司
高浓度样品：如果样品中含有较高浓度的Pi，可以使用ddH2O稀释，丌宜使用普通蒸馏水稀释。④(选做)样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织戒细胞内的Pi含量。
2、制备磷标准工作液：取适量的磷标准(1mg/ml)，按磷标准(1mg/ml)：磷标准稀释液=1：24的比例稀释，即获得磷标准(1.292mmol/L)。4℃保存，用于Pi的检测。
3、制备Pi显色工作液：取适量的PiAssaybuffer和钼酸铵显色液，等量混合，24h内使用。
4、Pi检测：按下表操作。
5、混匀，室温静置5min，分光光度计340nm处检测，比色杯光径1.0cm，以空白管调零，读取各管吸光度值。一般应2h内检测完毕。
计算：血清、血浆中无机磷计算公式：磷(mmol/L)=(A测定/A标准)×1.292
尿液中无机磷计算公式：磷(mmol/d)=(A测定/A标准)×1.292×N×24h尿量(L)
组织中磷计算公式：磷(mmol/mg)=(A测定/A标准)×1.292/待测样品蛋白浓度(mg/L)式中：A测定=待测管的吸光度值A标准=标准管的吸光度值N=尿液稀释倍数单位换算：mg/dl=mmol/L/0.323
健康成年人血清磷浓度：0.9～1.34mmol/L(2.76～4.16mg/dl)
1、本法应在5min～2h内检测。3h后标准管吸光度无变化，测定管吸光度随着时间的延长而上升。
2、溶血样本对检测有干扰，尽量避免采用溶血样本。
3、黄疸和脂血样本应做标本空白。加入物(ml)空白管标准管测定管ddH2O0.07——磷标准工作液(1.292mmol/L)—0.07—待测样品—0.07Pi显色工作液2.02.02.0。
4、本法能够用于自动生化分析仪终点检测法。
5、如果样品浓度过高，应用蒸馏水稀释后重测，结果乘以稀释倍数。
6、本法线性范围为0.33～3.88mmol/L。有效期：12个月有效。
