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产品名称:CM-葡聚糖凝胶 C-50
英文名称:CM Sephadex C-50
其他名称:CM葡聚糖凝胶C-50
种类:弱阳离子交换剂
主要作用官能团:羧甲基
Counter ion:钠
适用ph范围:6~10
分子量:小于30000
颗粒:球形,干燥状态下40-125um
颗粒结构:交联葡聚糖
化学稳定性:在水、盐水、有机溶剂、碱和弱酸性溶液中都是稳定的,在强酸中
凝胶骨架的糖苷键被水解。长期接触氧化剂将破坏凝胶,因而应避免使用。
物理稳定性:非常好的流动性和几乎可以忽略的膨胀率。
利用能力(mg/ml avained gel):190mg核糖核酸酶
流速:475cm/h
载量:4-5mmol/g
应用:低分子量蛋白、多肽、核苷酸以及巨大分子(MW>20000)
性状:白色珠状粉末。是在交联葡聚糖凝胶G-25上引入羧甲基的弱酸性阳离子交换剂。
用途:生化研究。它既有离子交换性质,又有G类葡聚糖凝胶的优点,如非特异性吸附很少,不易使包括酶在内的蛋白质变性等。并具有分离大分子量物质的特点。使用前需经蒸馏水胀,稀酸和稀碱等处理,再洗至中性后应用。蛋白质、多酞、酶、生物碱等的分离
CM-葡聚糖凝胶 C-50使用方法分类:
1.乙醇浸泡:在室温下,将干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小时,并不断搅拌以保证凝胶溶胀,用无盐水洗去残存的乙醇滤干;
2.无盐水浸泡:室温下,在无盐水中充分溶胀24小时,间隙搅拌,以保证凝胶的完全溶胀,然后;
3.盐酸浸泡:在常温下再用0.2NHCl浸泡12小时,间隙搅拌,滤干,水洗只中性;
4.将溶胀好的凝胶脱气后(真空抽滤或超声波)根据装柱要求一次性置入柱内,注意保持湿态装柱,并避免柱内产生气泡或断层;
5.上样前平衡层析柱至少3-5个柱体积直到记录仪基线变得平稳为止(流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值);
6.凝胶过滤的上样量一般为5%的柱床体积,我们建议初次上样控制在1-2%的床体积,视分离情况可以调整;脱盐时上样量可以达到20%的柱床体积,柱高的选择也与分离要求相关,柱高控制在40-50cm以下,过高的凝胶层会引起较大的反压,应当尽可能避免。难分离物质要有一定柱高和流速控制,脱盐时高径比为5:1即可;
7.洗脱方法:可以用无盐水,也可以采用上柱时的缓冲液洗脱;在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脱或盐梯度洗脱也可以完全分离纯化;
8.在位清洗(CIP)凝胶使用十次后作一次CIP,目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白。方法是以
40cm/h用1M氢氧化钠反向洗四个柱体积,再以至少三个柱体积平衡缓冲液再生。
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