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实时定量PCR(realtime-PCR)
点击次数:278发布时间:2012/3/29 17:44:21
更新日期:2012/3/29 17:44:21
所 在 地:其它
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实时定量PCR(realtime-PCR):
实时定量PCR是指在PCR指数扩增期间通过连续监测荧光信号强弱的变化来即时测定特异性产物的量,并据此推断目的基因的初始量,不需要取出PCR产物进行分离。
我们的该项服务使用的荧光染料是SYBR Green。在PCR反应体系中,加入过量SYBR荧光染料,SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后,发射荧光信号,而没有掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号,从而荧光信号的增加与PCR产物的增加同步。它的优点就是可以与任意引物、模板相配合,用于任意反应体系中。从经济角度考虑,它也比其它的探针的价格要便宜得多。但由于它能与所有的双链DNA结合,所以一旦反应体系中出现非特异扩增,那它就会影响到定量结果的性与重复性。要避免这种不利因素,可以通过选择良好的引物并优化反应条件以消除非特异性影响。
我们的该项服务使用的荧光染料是SYBR Green。在PCR反应体系中,加入过量SYBR荧光染料,SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后,发射荧光信号,而没有掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号,从而荧光信号的增加与PCR产物的增加同步。它的优点就是可以与任意引物、模板相配合,用于任意反应体系中。从经济角度考虑,它也比其它的探针的价格要便宜得多。但由于它能与所有的双链DNA结合,所以一旦反应体系中出现非特异扩增,那它就会影响到定量结果的性与重复性。要避免这种不利因素,可以通过选择良好的引物并优化反应条件以消除非特异性影响。
实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR) | |
实验内容 | 破碎组织或细胞样品,对其总RNA进行分离提取,并以总RNA为材料,反转录成cDNA后,以之为模板, SYBR Green作为染色剂,对照管家基因的标准曲线,实时、定量检测样品的目的基因。可开展对特异病原体DNA或RNA进行直接定量分析、基因表达研究、免疫T细胞群体V-β组分分析、基因多态性研究和基因突变分析等。 |
实验材料 | 需提供新鲜组织或细胞样品3-5mg,或提供cDNA模板和基因序列 |
实验器材 | 破碎仪,超声破菌仪、荧光定量PCR仪(型号:Corbett RotorGene 6000) |
实验时间 | 3—5个工作日 |
实验说明 | |
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