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酵母双杂交cDNA文库构建
点击次数：677发布时间：2012/3/30 10:45:06
更新日期：2012/3/30 10:45:06
所 在 地：其它
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相关标签：酵母双杂交cDNA文库构建
优质供应
详细内容
酵母双杂交cDNA文库构建
特点
→ 技术平台：Cloneminer II cDNA library construction kit （cat. No A11180）
→ 采用Invitrogen的Gateway位点特异性重组技术（Cloneminer II cDNA library construction kit）构建，使可能有相互作用的蛋白的下游表达和分析比以前更加方便
→ 通过使用三种报告基因和低拷贝数的载体，ProQuest™系统可以得出假阳性的可信结果。
→ 使用基于GAL4转录因子重建系统确定相互作用
→ 技术平台：Cloneminer II cDNA library construction kit （cat. No A11180）
→ 采用Invitrogen的Gateway位点特异性重组技术（Cloneminer II cDNA library construction kit）构建，使可能有相互作用的蛋白的下游表达和分析比以前更加方便
→ 通过使用三种报告基因和低拷贝数的载体，ProQuest™系统可以得出假阳性的可信结果。
→ 使用基于GAL4转录因子重建系统确定相互作用
原理
酵母双杂交技术产生以来，它主要应用在以下几方面：
（1） 检验一对功能已知蛋白间的相互作用。
（2） 研究一对蛋白间发生相互作用所必需的结构域。
（3） 用已知功能的蛋白基因筛选双杂交cDNA文库，以研究蛋白质之间相互作用的传递途径。
（4） 分析新基因的生物学功能，即以功能未知的新基因去筛选文库。ProQuest™系统依靠报告基因的转录激活来鉴定蛋白相互作用。将一个基因克隆到"诱饵"载体，pDEST™ 32，并和GAL4蛋白的DNA结合域（DBD）表达为融合蛋白。将第二个基因或者编码可能的相互作用子蛋白的cDNA文库克隆到"猎物"载体，pDEST™ 22，同GAL4的转录激活域（AD）表达为融合蛋白。当两个蛋白相互作用时，AD和DBD间距离被拉近，从而激活报告基因的表达。
服务流程
酵母双杂交cDNA文库构建
1） 提取总RNA，分离mRNA
2） 使用Cloneminer II cDNA library construction kit构建酵母双杂交文库
客户提供
1） 样品至少2g组织或1 x 10e7个或至少足够提取0.5mg总RNA的细胞
2）至少0.5mg的总RNA
我们提供
文库菌株（含20%甘油的SOC培养基）和文库构建报告（包括总克隆数CFU的鉴定图，文库单克隆菌落PCR鉴定图）
质量
→ 文库含有至少5 x10e6个原始克隆
→ 平均插入片断大小>1.2 kb
→ 有超过90%的克隆含有插入片段
详情请登入:www.biovol.net
