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猪圆环病毒抗体(PCV Ab)Elisa试剂盒说明书
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文件大小：31kb
上传时间：2012/7/13 8:40:15
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上 传 者：上海博宏生物科技有限公司
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猪圆环病毒抗体（PCV Ab）Elisa试剂盒说明书
本试剂盒仅供研究使用。
96T
使用目的：
本试剂盒用于测定猪血清、血浆及相关液体样本中圆环病毒抗体（PCV Ab）表达。
实验原理
猪圆环病毒抗体（PCV Ab）Elisa试剂盒说明书本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中猪圆环病毒抗体（PCV Ab）表达。用纯化的抗原包被微
孔板，制成固相抗原，可与样品中圆环病毒抗体（PCV Ab）相结合，经洗涤除去未结合的抗
原和其他成分后再与HRP 标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗
涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终
的黄色。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），与CUTOFF 值相比较，从而判定
标本中猪圆环病毒抗体（PCV Ab）的存在与否。
试剂盒组成
1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶
2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 阳性对照 0.5ml×1 瓶
3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 阴性对照 0.5ml×1 瓶
4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份
5 显色剂A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张
6 显色剂B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2 孔、阳性对照2 孔、空白对照1
孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）
2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先
加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不
触及孔壁，轻轻晃动混匀，
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此
重复5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15 分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止
液后15 分钟以内进行。
操作程序总结：
计算和结果判定：
试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10
临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15
阴性判定：样品OD 值< 临界值（CUT OFF）者为猪圆环病毒抗体（PCV Ab）阴性
阳性判定：样品OD 值≥ 临界值（CUT OFF）者为猪圆环病毒抗体（PCV Ab）阳性
。
注意事项
1．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。
2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
用完，板条应装入密封袋中保存。
3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5．底物请避光保存。
6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为630nm
7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M 的硫酸，使用时必须
注意安全。
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6 个月猪圆环病毒抗体（PCV Ab）Elisa试剂盒说明书
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