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犬的葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)酶联免疫吸附测定试剂盒
点击次数:206发布时间:2012/7/22 20:51:33
更新日期:2021/11/5 3:38:50
所 在 地:中国大陆
产品型号:96T/48T
优质供应
详细内容
中文名称:犬的葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)酶联免疫吸附测定试剂盒
英文名称:Canine Glucose Transporter 4 (GLUT4) ELISA Kit
保存条件:2-8℃
期:6个月
实验材料与试剂配制:
1.仪器与材料:酶标仪(使用前预热30分钟),微量加液器、吸头、蒸馏水或去离子水,滤纸。
2.缓冲液使用:加5ul的缓冲液于50ul的样品中,如果样品量不够或者不确定,缓冲液和样品的混合比例不要小于1:10即可。 混匀,静置1小时备用(如果标本是血清或者血浆,此步骤忽略)。
3.洗液的配制:按1:100的比例配制洗液备用。
样品收集、处理及保存
1.细胞培养上清:适用于检测体外培养的细胞分泌性成份。用无菌管收集细胞上清液,以1000×g离心15分钟,收集上清。
2.细胞:用PBS反复洗涤细胞3次,调整细胞浓度达到104-106/ml 左右,通过反复冻融,使细胞破坏并放出细胞内成份,或者细胞超声粉碎,离心取上清液检测。
3.血清:在室温下,血液自然凝固,以1000×g离心15分钟,取上清待测。
4.血浆:应根据标本的要求选择EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合后静置10-20 分钟后,以1000×g离心15分钟,收集上 清。
5.体液:包括胸腹水、脑脊液,分泌物等。使用不含热原和内毒素的离心管收集,以1000×g离心15分钟,收集上清。
6.组织标本:切取组织标本,称取重量0.5mg,加入500ul的PBS,用手工或匀浆器,或超声破碎仪将标本匀浆,以2000-3000 rmp离心20 分钟,收集上清进行检测。
7.样品中不能含有NaN3,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
8.保存:如果样品不能立即检测,应将其分装,-70 ℃保存,避免反复冷冻。保存过程中如出现沉淀,应再次离心。血液标本尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
操作步骤:
1.取出试剂盒,室温(20-25℃)放置 30分钟。
2.分组:取出 96孔板,根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数,把剩余的板条继续冷藏处理。分别设标准 品组(6个浓度)、空白孔、待测样品组。
注:为减少实验误差,性,建议设置复孔。
3.加样:依照标准品的顺序分别加入 100ul的标准品溶液于空白微孔中;空白对照孔加入 100ul的蒸馏水;其余微孔中加入
100ul的待测样本。
4.加酶标溶液:标准品组、待测样本组各孔中加入 50ul的酶标溶液(空白对照孔除外)。
5.温育:酶标板用封板纸密封后,放入湿盒内于 37℃恒温孵育1小时。
6.洗板:用稀释后的洗涤液注满每孔,静置15-30s,充分清洗酶标板 5次,用吸水纸拍干。
7.显色:各孔加入显色剂A液50ul后,再加入显色剂B液50ul。
8.终止:25-37℃下避光反应10-15分钟,加入50ul终止液。
9.读板:在450nm波长读取各孔的OD 值。 注:读板时必须拭干板底残留的液体和手指痕迹,读板时间控制在终止反应后的 30分钟内,以免影响性。
注意事项:
1.实验操作中必须使用一次性吸头,避免交叉污染。
2.加样:加样时,要控制加样速度,避免孔与一孔间的时间间隔过大,否则将会导致不同的预孵育时间,从而影响实验的性以及重复性。
3.孵育:严格按照说明书上规定的孵育时间和温度进行。
4.反应时间的控制:加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化,如果颜色较深,请提前加入终止液终止反应。
5.建议实验前预测样品含量,如样品浓度过高,应对样品进行稀释,计算结果时乘以相应的稀释倍数。
6.建议使用本试剂盒时先做预实验(即先做标准曲线,试用几个标本),如果对本试剂盒有任何疑问,可和所购经销商联系,如果因运输过程导致试剂盒失效,可要求调换,但概不承担产品本身以外的任何损失。
安全性
1. 避免人体直接接触显色剂A、B和终止液。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
2. 实验中不要进食、抽烟或使用化妆品。
3. 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
保存条件及期:
1.试剂盒保存:2-8℃
2.期:6个月