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人细胞角蛋白13(CK-13)ELISA 试剂盒
点击次数：125发布时间：2012/9/5 17:22:04
更新日期：2021/11/5 12:24:20
所 在 地：中国大陆
产品型号：96T/48T
相关标签：人细胞角蛋白13(CK-13)ELISA 试剂盒
优质供应
详细内容
中文名称：人细胞角蛋白13（CK-13）ELISA 试剂盒
英文名称：Human cytokeratin 13,CK-13 ELISA Kit
保存条件：2-8℃
有效期：6个月
实验材料与试剂配制：
1.仪器与材料：酶标仪（使用前预热30分钟），微量加液器、吸头、蒸馏水或去离子水，滤纸。
2.缓冲液使用：加5ul的缓冲液于50ul的样品中，如果样品量不够或者不确定，缓冲液和样品的混合比例不要小于1:10即可。 混匀，静置1小时备用（如果标本是血清或者血浆，此步骤忽略）。
3.洗液的配制：按1:100的比例配制洗液备用。
样品收集、处理及保存
1.细胞培养上清：适用于检测体外培养的细胞分泌性成份。用无菌管收集细胞上清液，以1000×g离心15分钟，收集上清。
2.细胞：用PBS反复洗涤细胞3次，调整细胞浓度达到104-106/ml 左右，通过反复冻融，使细胞破坏并放出细胞内成份，或者细胞超声粉碎，离心取上清液检测。
3.血清：在室温下，血液自然凝固，以1000×g离心15分钟，取上清待测。
4.血浆：应根据标本的要求选择EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合后静置10-20 分钟后，以1000×g离心15分钟，收集上 清。
5.体液：包括胸腹水、脑脊液，分泌物等。使用不含热原和内毒素的离心管收集，以1000×g离心15分钟，收集上清。
6.组织标本：切取组织标本，称取重量0.5mg，加入500ul的PBS，用手工或匀浆器，或超声破碎仪将标本匀浆，以2000-3000 rmp离心20 分钟，收集上清进行检测。
7.样品中不能含有NaN3，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
8.保存：如果样品不能立即检测，应将其分装，-70 ℃保存，避免反复冷冻。保存过程中如出现沉淀，应再次离心。血液标本尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
操作步骤：
1.取出试剂盒，室温（20-25℃）放置 30分钟。
2.分组：取出 96孔板，根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数，把剩余的板条继续冷藏处理。分别设标准 品组（6个浓度）、空白孔、待测样品组。
注：为减少实验误差，保证准确性，建议设置复孔。
3.加样：依照标准品的顺序分别加入 100ul的标准品溶液于空白微孔中；空白对照孔加入 100ul的蒸馏水；其余微孔中加入
100ul的待测样本。
4.加酶标溶液：标准品组、待测样本组各孔中加入 50ul的酶标溶液（空白对照孔除外）。
5.温育：酶标板用封板纸密封后，放入湿盒内于 37℃恒温孵育1小时。
6.洗板：用稀释后的洗涤液注满每孔，静置15-30s，充分清洗酶标板 5次，用吸水纸彻底拍干。
7.显色：各孔加入显色剂A液50ul后，再加入显色剂B液50ul。
8.终止：25-37℃下避光反应10-15分钟，加入50ul终止液。
9.读板：在450nm波长读取各孔的OD 值。 注：读板时必须拭干板底残留的液体和手指痕迹，读板时间控制在终止反应后的 30分钟内，以免影响准确性。
注意事项：
1.实验操作中必须使用一次性吸头，避免交叉污染。
2.加样：加样时，要控制加样速度，避免孔与*后一孔间的时间间隔过大，否则将会导致不同的预孵育时间，从而影响实验的准确性以及重复性。
3.孵育：严格按照说明书上规定的孵育时间和温度进行。
4.反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化，如果颜色较深，请提前加入终止液终止反应。
5.建议实验前预测样品含量，如样品浓度过高，应对样品进行稀释，计算结果时乘以相应的稀释倍数。
6.建议使用本试剂盒时先做预实验（即先做标准曲线，试用几个标本），如果对本试剂盒有任何疑问，可和所购经销商联系，如果因运输过程导致试剂盒失效，可要求调换，但概不承担产品本身以外的任何损失。
安全性
1． 避免人体直接接触显色剂A、B和终止液。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2． 实验中不要进食、抽烟或使用化妆品。
3． 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
保存条件及有效期：
1.试剂盒保存：2-8℃
2.有效期：6个月
