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胶体金标记试剂的检测
点击次数：400 发布时间：2012/9/20 9:09:50
胶体金粒子在pH值接近蛋白质的pI时，二者容易形成牢固的结合物。胶体金粒子可以广泛地与抗免疫球蛋白抗体、蛋白A、链霉亲合素等结合。由于结合的蛋白可与金粒子缓慢地分离，因此，胶体金试剂在使用前应该通过洗涤去除游离蛋白。
金标记*初用于电子显微镜研究，但亦可用于光学显微镜，得到比酶标记方法较高的分辨率，而且，可避免底物的准备及内源性酶活性干扰等问题。金标记在光学显微镜水平虽缺乏敏感性，但应用光化银增强显影方法克服了这一问题。
非扩大的金标记可直接用于光学显微镜检测，在明视野下，依据反应强度的不同，标记范围从淡粉色到深红色，Nomarski不同的干扰与光学显微镜形成对照，使标记物呈现深红色到黑色。使用银增强方法，金粒子由金属银包被形成一种黑褐色标记物，通过明视野极易观测。胶体金标记方法可与许多组织化学染色方法相配合。金标记反应亦很容易控制，因为染色的呈现过程可在光学显微镜下直接监测，并可有控制地继续进行。
1．需要的溶液和特殊设备
0．5mol／L的枸橼酸钠（pH3．5） 5．6％羟苯醌（避光保存）；
0．73％乳酸银（避光保存）；
1％乙酸
标准的固定液。
检测用的暗室，光学显微镜（通常带有照相机以便于记录结果）。
2．操作步骤
（1）在蒸馏水中短暂地漂洗标本片，标本片可以在染色后直接检测或者用银增强处理后观察，用Gelvattol或者Mowiol封片；
（2）银增强方法，转移样本到暗室中。检测剂的准备：混合2份0．5mol／L枸橼酸钠（pH3．5），3份5．6％羟苯醌和12份水。使用前再直接加3份0．73％乳酸银；
（3）将金标记物处理的标本片浸泡于此检测液中，室温孵育2～3min；
（4）用1％乙酸短暂地漂洗，并在标准摄影固定液中固定数分钟；
（5）优化：如果需要，进行复染；
（6）样品用DPX封片。
原创作者：上海金穗生物科技有限公司
