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单克隆抗体的鉴定
点击次数：446 发布时间：2012/10/13 10:00:05
对制备的McAb进行系统的鉴定是十分必要的，应做下述5个方面的鉴定。
1．抗体特异性的鉴定 除用免疫原（抗原）进行抗体的检测外，还应该用与其抗原成分相关的其他抗原进行交叉试验，方法可用ELISA法、IFA法。例如：①制备抗黑色素瘤细胞的McAb，除用黑色素瘤细胞反应外，还应该用其他脏器的肿瘤细胞和正常细胞进行交叉反应，以便挑选肿瘤特异性抗原或肿瘤相关抗原的单克隆抗体。②制备抗重组细胞因子的单克隆抗体应首先考虑是否与表达菌株的蛋白有交叉反应，其次是与其他细胞因子间有无交叉反应。
2．McAb的Ig类与亚类的鉴定 一般在用酶标或荧光素标记的第2抗体进行筛选时已经基本上确定了抗体的Ig类型。如果用的是酶标记或荧光素标记的兔抗鼠IgG或IgM，则检测出的抗体一般是IgG类或IgM类。至于亚类则需要用标准抗亚类血清系统作双扩或夹心ELISA来确定。在作双扩试验时，如加入适量的PEG（3％）更有利于沉淀线的形成。
3．McAb中和活性的鉴定 用动物或细胞的保护实验来确定McAb的生物学活性。例如，如果确定抗病毒McAb的中和活性，则可用抗体和病毒同时接种于易感动物或敏感细胞，来观察动物或细胞是否得到抗体的保护。
4．McAb识别抗原表位的鉴定 用竞争结合实验测相加指数的方法测定McAb所识别抗原位点，来确定McAb的识别表位是否相同。
5．McAb亲和力的鉴定 用ELISA或RIA竞争结合实验来确定McAb与相应抗原结合的亲和力。
原创作者：上海金穗生物科技有限公司
