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网状内皮组织增殖病诊断技术
点击次数：358 发布时间：2012/10/19 9:29:59
1．病原学诊断
（1）病毒分离
①采样。RE病毒血症往往是一过性的，而且毒价相当低，但胚胎感染或发生免疫抑制时毒价则很高。可从不同的病变组织中分离到REV，也可从血液中获得。含细胞的悬液含毒量高，而血中的白细胞、淋巴细胞是分离病毒的较好材料。疑似病鸡的血清或血浆，采集后立即用于接种鸡胚成纤维细胞培养（CEF）或置于一70~C保存备用。疑似病鸡的脾脏、肝脏、肾脏，采集后立即研磨成悬浮液供接种CEF，或立即置于一70~C保存。疑似污染REV的弱毒疫苗，在用于分离病毒前必须保存在相应疫苗规定的条件下。
②病毒的分离。分离病毒时可取病禽的组织悬液（采取脾或肿瘤组织，制成10％悬液）、全血、血浆或其他接种物接种在易感的组织培养物中。一般细胞性接种物比脱离细胞（无细胞）性接种物好，因为前者常比后者含有较高的病毒滴度。组织培养物至少应坚持两次7天的盲目继代，观察细胞病变，并用抗REV的特异性血清或单抗检测免疫荧光抗原。
（2）病毒的鉴定 可用免疫荧光、免疫过氧化物酶斑点试验测定培养物或血浆中的REV。聚合酶链反应（PCR）具有灵敏度高、特异性强的特点，即使血清转阴，该方法也能检出血中的REV抗原。
2．血清学诊断
检测禽群对REV抗体是否阳性或阳性率程度可用于以下几个流行病学研究的目的：①该禽群是否已有REV感染，SPF鸡群必须定期检测其中是否出现抗体阳性的群体；②根据种禽产前产后对REV抗体阳性率的变化趋势，判断种禽产生垂直感染的可能性大小；③雏禽出壳后，检测母源中抗体存在与否及阳性率大小，可判断其对横向感染的易感性。抗体的检测方法取决于实验室设备条件，既可采用EIASA也可选用IFA，前者需特定型号的酶标仪，后者需荧光显微镜；前者有商品化试剂盒供应，后者需自制抗原；前者只能定性，后者可比较个体的抗体滴度水平。前者可电脑读数，适于大批量样品，但成本较高；后者人工判读，不适于大批量样品，但成本相对较低。目前市场上有商品化的试剂盒可以用于REV抗体的检测，可选用进口的试剂盒（如IDEXX公司），严格按厂家提供的说明书操作。 此外琼脂—凝胶沉淀，病毒中和试验等均可用于REV抗体的检测。可采集病鸡血清或卵黄进性抗体检测，与血清相比，用卵黄则更方便。
3．鉴别诊断
该病应与马立克病或淋巴细胞性白血病相鉴别诊断。肿瘤病变中如有淋巴网状细胞应认为该病有相当诊断价值，因为这种细胞对后两种病都不是典型的病变。急性网状细胞瘤由于自然病例少、潜伏期短，故易与MD或LL区别。应注意矮小综合征与鸡MD、鸡腔上囊性淋巴瘤与I-L的鉴别诊断。后者可结合病原学和血清学技术加以区别。PCR可准确诊断该病，因只有来源于REV感染组织的DNA才能扩增。未感染鸡血液或MD、LL肿瘤的DNA不能扩增。此外，也可通过电镜技术进行鉴别诊断。
原创作者：上海金穗生物科技有限公司
