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使用CSA技术的技巧
点击次数:384 发布时间:2012/11/24
在使用CSA技术时,也应注意某些组织细胞内内源性过氧化物酶、内源性生物素的干扰。内源性过氧化物酶可用0.3%~3%H202抑制其活性。
标记的杂交探针或抗体的非特异性结合,以及其他目标探针的非特异性结合放大,都可给实验的分析带来困难。因为CSA技术的显著放大能力,对非特异性结合的信号也具有放大作用。
但因为CSA具有极高的敏感性,因此抗体和核酸探针可稀释到相当高的浓度,在目标物达到饱和所需的浓度以下,这样非特异性背景染色将大大降低或消失,而且稀释度的提高还可节约昂贵试剂的用量。
哺乳动物细胞和组织内含有生物素依赖的羧基酶,它是许多功能代谢必需的。当使用生物素链霉亲和素检测系统时,这些含有生物素的酶产生很强的背景信号。在使用时应预先封闭组织细胞内的内源性生物素。