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目测法确定胶体金与待标记蛋白质用量
点击次数：392 发布时间：2013/2/26
将待标记的蛋白质逐级稀释后，以5～40ug各取等体积顺序加入一系列装有lml胶体金的试管中，另设一不加蛋白的对照管，混匀。5rain后，再于上述各管中分别加入0．1ml10％NaCl溶液，混匀后，静置20min，观察结果。未加蛋白质和加入蛋白质的量不足以稳定胶体金的试管，呈现由红变蓝的聚沉现象，而加入蛋白质量达到稳定量的试管则保持红色不变。其中蛋白质的试管即含稳定lml胶体金的必需蛋白质量。·在此基础上再加10％，即为稳定蛋白质的实际用量[设X＝加入蛋白质量，X十（XXl0％）＝每毫升胶体金需加蛋白量），见图或加入BSA使其*终浓度为5％。
胶体金待标记蛋白质用量比例测定图标
用于测定颗粒直径为5nm的胶体金标记蛋白质的用量，测定时必须在每毫升金溶液中加入30％H202 10ial，用0。lm01/LK2CO3调pH至待标记蛋白质的等电点，再加入蛋白质溶液（5—40/ag）和100ul 10％NaCl，5min后观察结果，不出现蓝色絮状物的试管即是足以稳定胶体金的蛋白质量。一般羊抗兔IgG适量为27ug/ml胶体金溶液，葡萄球菌A蛋白适量为15ug/ml胶体金溶液。
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