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构建随机化VHCDR3噬菌体抗体文库
点击次数：357 发布时间：2013/3/2
因为VHCDR3的序列位于scFv基因中间所以随机化更加复杂。抗体文库构建的尸CR 分为两步进行。首先，VH基因以随机化引物（VHFOR）和一条以载体主链为基础，并位于scFv基因上游的引物（LMB3）进行PCR扩增。其后，在另一个PCR中，VL基因的扩增是用基于载体基因m的引物（FdSEQ）和一条与VHFOR引物部分互补的引物（VHBACK）进行的。然后，采用PCR剪接扩增的VH和VL基因片段，并用引物LMB3和PdSEQ再次进行PCR扩增，从而构建全长的VHCDR3 scFv文库。
多样化的VHCDR3 scFv基因文库的构建策略。
首先，VH基因用随机化引物（VuFOR）和1条以载体主链为基础的引物（LMB3）进行PCR扩增。在另1个PCR中，VL基因的扩增是用基于载体基因Ⅲ的引物（FdSEQ）加上l条与VHFOR引物部分互补的引物（VuBACK）进行的。然后，采用PCR剪接扩增的VH和VH基因片段，并用引物LMB3和FdSEQ再次PCR，从而构建全长的VHCDR3 scFv文库
