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噬菌体展示文库fUSE5体外筛选的特殊步骤
点击次数：418 发布时间：2013/3/14
1．为了洗脱细菌，用1mI的K9lKan肉汤菌液重悬细胞沉淀，并于室温下孵育20分钟。也可以选择通过向每份沉淀中添加100p1的1％NP—40来裂解细胞，并在加入900ul的K91Kan肉汤菌液之前，将细胞置于冰上裂解5分钟，然后在室温下孵育20分钟。由于噬菌体结合在4℃进行，所以裂解作为可选步骤。
2．为了滴定fd噬菌体的产出量，将步骤1所得分别取1ul、10ul及100ul涂布到四环素浓度为40ug/m1的LB琼脂平板中，每种涂布三个。可以采用玻璃或金属刮子，或无菌玻璃珠来涂布细菌。将平板置于37℃孵育16小时（过夜）。
3．为了测定每份器官或组织的噬菌体总的产出量，将每个平板上的克隆（TU）数目除以涂板的体积（1ul、10ul或100ul），然后再乘以1000ul。对每份器官和组织中的三个平I板的计数取平均值，并作图。
4．扩增及纯化回收的fd噬菌体。
