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磺胺甲恶唑（SMZ）酶联免疫分析（ELISA）
点击次数：332 发布时间：2013/3/13 10:07:09
磺胺甲恶唑（SMZ）酶联免疫分析（ELISA）
试剂盒使用
1 使用目的：
1.1 磺胺甲恶唑（SMZ）标准品溶液：0ppb,0.1ppb,0.3 ppb,0.9ppb,2.7 ppb,8.1ppb1.2 浓缩洗涤液：用蒸馏水按1:20（1+19）稀释备用
1.3 样本稀释液：用蒸馏水按1:10（1+9）稀释备用
1.3 显色剂：已备用，避免光线直照
1.4 反应终止液：已备用
2 样品处理程序（样品在提取过程中，要严格按说明书操作，提取过程中应准确稀释，否则
会出现结果不准确，样品应当保存在阴凉避光之处及冷藏保存）
2.1取10g粉碎的样品，加 20ml 70%甲醇溶液
2.2强力振荡3分钟
2.3用Whatman No 1滤纸过滤
2.4取25μl处理后的样品，加入25μl样本稀释液于反应孔中（样本稀释倍数为2）
3 酶免分析步骤
3.1 实验须知
3.1.1 实验开始前请将所有试剂于盒外充分恢复至室温（25±2℃），时间约2小时。回温至室
温（25±2℃）后再取出微孔条，多余的微孔条重新密封立即于2~8℃干燥保存
注：一定保证回温充分，否则影响检测的精确度和准确度。
3.1.2 使用后请立即将试剂放回2~8℃保存
3.1.3 请不要改变分析程序
3.1.4 请使用精确的微量移液器
3.1.5 操作一旦开始，请不要中断任何程序
3.1.6 ELISA结果的可重复性极大程度的取决于操作程序，请严格按照要求操作
3.1.7 为避免交叉污染，每个标准品和样品均应使用不同的吸头加样
3.1.8 加样时请勿让吸头接触微孔中的溶液或内表面
3.2 分析步骤
3.2.1 预行编号，标记B0、标准品和样品的位置，推荐进行双孔检测
3.2.2 取所需数量的微孔（微孔条可拆），将多余板条重新密封并立即放回2~8℃保存
3.2.3 样品稀释液（10×）、浓缩洗涤液（20×）稀释成工作液（蒸馏水或去离子水稀释）
3.2.4 在B0孔中加入50μl0.0 ng/ ml标准品溶液
3.2.5 在各标准孔中加入50μl的标准品溶液
3.2.6 在各样品孔中加入50μl样品溶液
3.2.7 在所有孔中加入50μl的磺胺甲恶唑（SMZ）抗体酶结合物
3.2.8 轻轻晃动反应板几秒钟。
3.3 37℃温浴30min （温浴过程中不时轻拍反应板，可以减少双孔误差）
3.3.1 甩掉孔中液体，用洗液洗涤微孔板5次，*后一次应在吸水纸上拍打以完全除去孔中液
3
体。
3.4 反应
3.4.1 洗涤程序完成后，立即用微量移液器在每个微孔中先加入50μl显色液A，再加 50μl显
色液B；轻微晃动反应板使之彻底混匀
3.4.2 37℃温浴10min
3.4.3 每孔中加入50μl终止液，混匀
3.4.4 在450nm下检测吸光度，结果在5min内读取。
4 结果计算
4.1定量分析
4.1.1所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值（B）除以个标准（0标准）
的吸光度值（B0）再乘以100%，即百分吸光度值。
B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值
B0—0μg/L标准溶液的平均吸光度值
4.1.2以磺胺甲恶唑（SMZ）浓度的对数值为X轴，百分吸光度值为Y轴，绘制标准曲线图。
根据样品百分吸光度值，可从曲线上得到对应点的横坐标，即为磺胺甲恶唑（SMZ）浓度
的对数值，求得反对数即为测定液中磺胺甲恶唑（SMZ）浓度C（ppb）
4.1.3由于样品经过了预先稀释，因此根据标准曲线所得出的样品浓度一定要再乘以其稀释
倍数。
4.2 半定量测定
4.1.1目测半定量测定：首先选择一个适当的标准液与样品同运行，根据样品与标准品吸光
度值的高低比较，判断样品浓度值是小于还是大于标准值。
4.1.2仪器半定量测定：首先选择一个适当的标准液与样品同运行，根据样品与标准品颜色
深浅比较，判断样品浓度值是小于还是大于标准值。
5 特异性
物质 交叉反应
磺胺甲恶唑（SMZ） 100%
6 试剂盒参数
本试剂盒检测下限为0.05ppb
B0吸光度*佳值应大于1.0
试剂盒吸光度板内误差小于8％，板间误差小于15％。
用本说明书提供的组织样本提取方法回收率大于80％。
7
试剂盒提供的标准曲线范围为0.1ppb~8.1ppb。
8 分析限制
本试剂盒检测为阳性的样品应该用另一种方法如HPLC或GC/MS加以确证。
原创作者：上海泛轲实业有限公司
