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技术文章
人p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)试剂盒组成
人p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)试剂盒组成
1 30倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 7 终止液 6ml×1瓶
2 酶标试剂 6ml×1瓶 8 标准品(96U/L) 0.5ml×1瓶
3 酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶
4 样品稀释液 6ml×1瓶 10 说明书 1份
5 显色剂A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2张
6 显色剂B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1个
标本要求
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
试剂盒组成及试剂配制:
1.酶联板(Assayplate):一块(96孔)。
2.标准品(Standard):2瓶(冻干品)。
3.样品稀释液(SampleDiluent):1×20ml/瓶。
4.生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibodyDiluent):1×10ml/瓶。
5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液(HRP-avidinDiluent):1×10ml/瓶。
6.生物素标记抗体(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7.辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8.底物溶液(TMBSubstrate):1×10ml/瓶。
9.浓洗涤液(WashBuffer):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10.终止液(StopSolution):1×10ml/瓶(2NH2SO4)。
计算
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
生物素标记抗体的稀释原则:
临用前以生物素标记抗体稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素标记抗体加990μl生物素标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。
原创作者:上海泛轲实业有限公司