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人Bcl-2相关X蛋白(BAX)试剂盒说明书
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文件大小：27kb
上传时间：2012/7/23 11:30:17
文件类型：doc
上 传 者：上海泛轲实业有限公司
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人Bcl-2相关X蛋白（BAX）试剂盒使用目的：
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中Bcl-2相关X蛋白（BAX）含量。
人Bcl-2相关X蛋白（BAX）试剂盒实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人Bcl-2相关X蛋白（BAX）水平。用纯化的人Bcl-2相关X蛋白（BAX）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入Bcl-2相关X蛋白（BAX），再与HRP标记的Bcl-2相关X蛋白（BAX）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的Bcl-2相关X蛋白（BAX）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人Bcl-2相关X蛋白（BAX）浓度。
试剂盒组成
1 20倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 7 终止液 3ml×1瓶
2 酶标试剂 3ml×1瓶 8 标准品（48μg/L） 0.5ml×1瓶
3 酶标包被板 12孔×4条 9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶
4 样品稀释液 3ml×1瓶 10 说明书 1份
5 显色剂A液 3ml×1瓶 11 封板膜 2张
6 显色剂B液 3ml×1/瓶 12 密封袋 1个
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
24μg/L 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
12μg/L 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
6μg/L 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
3μg/L 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
1.5μg/L 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品*终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
温育：操作同3。
洗涤：操作同5。
显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
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