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上海泛柯为您介绍ELISA试剂盒方法类型和操作步骤
ELISA试剂盒实验方法:
酶联免疫法/酶免法(ELISA)
检测原理:
采用双抗体夹心ABC-ELISA法
样品类型(SAMPLETYPES):
标本必须为液体,不含沉淀。包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血浆。每个标本量收集体积=100ul×检测种类。取材前须向销售人员索要说明书。
操作步骤:
用于检测未知抗体的间接法:
用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过夜。次日洗涤3次。
↓
加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)
↓
于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml,37℃孵育30-60分钟,洗涤,*后一遍用DDW洗涤。
↓
加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分钟。
↓
终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
↓
结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
产品范围:
人细胞,小鼠细胞,大鼠细胞,猪细胞,兔细胞,猴细胞,马细胞,牛细胞,羊细胞,犬细胞,其它动物细胞因子;细胞凋亡,活性多肽、自身抗体,血栓与止血,
骨代谢,肝纤维化,肿瘤,激素内分泌、自身抗体科研ELISA检测试剂盒
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