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拌刀豆球蛋白琼脂糖凝胶4B F0061
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详细内容
英文名称:Con A Sepharose 4B
其他名称:拌刀豆球蛋白琼脂糖凝胶4B
级别:BR
Ligand density:10-16mg Con A/ml drained medium
Available capacity:20-45mg porcine thyroglobulin/ml medium
Bead structure:4% agarose
Bead size range:45~165um
Mean bead size:90um
Max linear flow rate:75cm/h at 25℃;HR 16/10 column;5cm bed height
pH stability:long term and working,short term :4~9
Chemical stability:Stable to all commonly used aqueous buffers.Chelating agents such as EDTA, 8 M urea or solutions having a pH below 3 should be avoided as these conditions results in removal of manganese from the lectin with loss of activity as a result
Physical stability:Negligible volume variation due to changes in pH or ionic strength
亲和介质使用:
1、 装柱:该介质凝胶从4℃冰箱中取出后在室温下缓慢振摇恢复到室温,然后再装柱,以免产生气泡影响柱效。
2、 平衡:结合缓冲液(Binding Buffer)为20mmol/LTris-HCl缓冲液,pH7.4,其中含1mM MnCl2,1mM CaCl2,0.15M NaCl。由于介质保存液含有20%乙醇,因此装好柱的介质必须进行平衡。平衡介质所需的液体约为10个柱床体积。由于凝集素和糖基结合强度弱,为促进糖基结合,清洗缓冲液中可以不含有0.15M NaCl。
3、 吸附:预分离组分经过结合缓冲液透析后进行上柱吸附。
4、 清洗:待预分离组分已经都进入介质中后,加入清洗液体,洗去非特异吸附蛋白,大约5-10倍柱体积。
5、 洗脱:可以用0.1-0.5M糖类进行线性或梯度洗脱,例如用α-甲基-D-甘露糖苷(α-D-methylmannoside),或α-甲基-D-葡萄糖苷(α-D-methylglucoside),缓冲液为20mmol/L Tris-HCl缓冲液,pH7.4,并含有0.15M NaCl。强结合组分可以采用低pH值(但不得低于pH3)缓冲液 ,即用0.1M,pH6.5的硼酸缓冲液进行洗脱。
亲和介质再生:
ConA 琼脂糖凝胶的再生处理方法:每次采用2-3倍体积、含0.5M/L NaCL、高pH(8.5)值和低pH(4.5)缓冲液交替清洗柱子,交替3次。再用3-5倍体积的清洗缓冲液清洗。高pH值缓冲液可以采用0.1MTris-HCL,低pH值缓冲液可以采用0.1M柠檬酸缓冲液。洗脱强力结合的组分,可以采用20-50%乙醇线性洗脱
性状:含20%乙醇,底部为乳白色胶体
用途:生化研究。Con A 琼脂糖凝胶用于各种含甘露醇及葡萄糖残基的糖、糖蛋白、糖脂等物质的分离纯化
保存:2~8℃
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