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生物芯片的制作方法
点击次数：624 发布时间：2012/9/22 7:51:56
DNA微阵列的制作工艺已经比较成熟，典型的有四种方法：光引导原位合成法，打印原位合成法，分子印章原位合成法，点样法。针对DNA的二级结构会导致失真的杂交结果（链内杂交问题），人们研发出了通过使用肽核酸（Peptide Nucleic Acids, PNA）探针解决该问题的新方案。PNA与互补的DNA或RNA序列有更强的亲和性及特异性，杂交后更加稳定，并且PNA探针比DNA探针更容易接近靶序列。Henrik Stender等采用荧光原位杂交（FISH）法，通过PNA探针检测、计数大肠杆菌，与传统的方法相比，不但提高了灵敏度，而且更加快速便捷。值得特别提出的是，*近国内东南大学研制出了双链DNA探针芯片：把3’端具有反向互补序列的单链寡核苷酸点到玻片上，“退火”使反向互补序列形成“发卡”结构，充当引物，*后经Klenow酶延伸形成完整的双链。该种芯片为序列特异性DNA-蛋白质相互作用的研究提供了一种新的技术平台。
蛋白质芯片比基因芯片难于制作，且定位于载体表面的蛋白质分子易于改变空间构象而失去原有的生物活性。故而，目前研究热点集中在如何在保持蛋白质功能的前提下，将其固化于载体表面。R.Bashir小组在硅片表面热氧化形成SiO2层，通过射频溅射（radio frequency sputtering）覆盖铂于SiO2层上，然后把硅片置于抗生物素蛋白（Avidin）反应液，缓冲液冲洗后，用生物素与芯片上的Avidin反应，证明Avidin仍保持生物活性。凝胶也是一种较好的载体，Argonne实验室在玻片上刻出小方孔，向里面加入含丙烯酰胺的反应液，紫外光照射使丙烯酰胺聚合。*后向凝胶块中加入蛋白溶液，利用戊二醛活化凝胶使其与蛋白连结。他们利用此类芯片进行了抗原抗体的检测和酶促反应动力学研究。
原创作者：上海万零生物科技有限公司
