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猪前体Pro白介素1β（IL-1β）ELISA试剂盒说明书/价格
点击次数：320发布时间：2012/8/2 15:11:38
更新日期：2024/9/10 17:02:30
所 在 地：中国大陆
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详细内容
猪前体Pro白介素1β（IL-1β）ELISA试剂盒说明书/价格
试剂盒特点：慧颖生物采用纯进口试剂和进口工艺流程，所生产的试剂盒质量稳定、重复性好、特异性强、灵敏度高，与复旦大学、上海第二军医大学、中科院、江南大学等重点院校保持的合作关系。
规格：48T/96T
价格：2200元
优惠价格：1600元
联系人：王小姐
产品货号： EIA06274
使用前阅读说明书。本酶联免疫试剂盒是基于经典酶联夹心技术原理，能测量猪Pro IL-1β，只能用于研究用途，不得用于医学诊断。
工作原理
IL-1β，白介素1β。IL-1β在免疫调节和炎症反应过程中起中心作用。类风湿、结肠炎等病症也和IL-1β的产生过多有关。IL-1α和IL-1β有25%的同源性。合成IL-1β的细胞很广泛，包括单核细胞、巨噬细胞、星形细胞、NK细胞、角化细胞、内皮细胞等。两者合成时都是31KDa的前体，经剪切后成为17.5KDa的成熟蛋白质。IL-1β前体在细胞内合成，并无生物学活性。所提供的ELISA Kit是典型的夹心法酶联免疫吸附测定试剂盒（ELISA）。预先包被的抗体为单克隆抗体，检测相抗体为多克隆抗体，经生物素（biotin）标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后，PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应；经过PBS或TBS的洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子呈正相关。
每套试剂盒中内容（96T）
| 材料 | 数量 |
| 标准品 | 2vial |
| 预包被抗体的96孔板 | 96T （ 8×12） |
| 生物素标记抗体 | 96T （1:100） |
| ABC（过氧化物酶标记亲和素） | 96T （1:100） |
| 样品稀释液 | 96T |
| 抗体稀释液 | 96T |
| ABC稀释液 | 96T |
| TMB显色液A | 96T |
| TMB显色液B | 96T |
| TMB终止液 | 96T |
| ELISA专用洗涤液 | 96T（1:25） |
需要而未提供的试剂和器材
1． 37℃恒温箱。
2． 标准规格酶标仪。
3． 自动洗板机。
4． 单通道或多通道可调节移液器以及其吸头。
5． 蒸馏水，容量瓶等
6． 干净的试管和Eppendof管。
注意事项
1． 从-20℃取出的试剂盒，在4℃解冻过夜。盒内每一瓶解冻的溶液在开启瓶盖之前都要轻轻摇匀，避免解冻时出现的分层，否则会出现浓度不均一的现象。
2． 开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。
3． 配制各种试剂时，切记混匀！
4． 用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。
5． 建议所有标准品、样本都做双份检测。
6． 要严格避免操作过程中酶标板干燥。干燥会使酶标板上生物成份迅速失活！
7． 为免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和试管。
洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的PBS或TBS洗涤缓冲液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
样品的准备和保存
样品如果不立即分析，应分装后冷冻保存，且避免反复冻融。
血清——用干净试管收集血液，室温凝固2小时或4℃过夜，离心1000×g 10分钟，收集血清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
细胞培养、组织匀浆、体液——离心去除沉淀，立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
样品稀释的一般原则
用户须查阅文献了解标本内待测因子的含量，决定适当的稀释倍数，以使稀释后样品中待测因子的浓度处于ELISA试剂盒的检测范围。样品的稀释应有详细记录。
试剂的准备和保存
A. 标准品的稀释和使用：在使用前2小时内准备。将冻干品管内加入1ml样品稀释液，溶解后混匀后做倍比稀释。
稀释后的标准品在2小时内使用。
B．生物素标记抗体工作液：在使用前2小时内准备。
1． 根据每孔需要0.1ml计算总的用量（实际配制时应多配制0.1-0.2ml）。
2． 按10ul生物素标记抗体加抗体稀释液990ul的比例配制工作液。轻轻混匀。
C．亲和素-过氧化物酶复合物（ABC）工作液的准备：在使用前1小时内准备。
1． 根据每孔需要0.1ml计算总的用量（实配时应多配制0.1-0.2ml）。
2． 按10ul亲和素-过氧化物酶复合物（ABC）加ABC稀释液990ul的比例配制工作液。轻轻混匀。
D. TMB显色工作液的准备：在使用之前30分钟，按TMB显色液A 9份加 TMB显色液B 1份的比例配制TMB显色工作液。
操作程序
1． 确定本次检测所需的已包被抗体的酶标板孔数目。
2． 将倍比稀释的标准品各0.1ml依次加入一排7孔中，1孔只加样品稀释液的作为对照。处理后的标本按100ul每孔加入。
3． 酶标板加上盖，37℃反应90分钟。
4． 反应后用自动洗板机吸去酶标板内的液体；或甩去酶标板内液体，再对着吸水纸拍几下。洗涤2次。
5． 将准备好的生物素抗体工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应60分钟。
6． 0.01M TBS或0.01M PBS洗涤3次，每次浸泡1分钟左右。
7． 将准备好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应30分钟。
8． 0.01M TBS或0.01M PBS洗涤5次，每次浸泡1-2分钟左右。
9． 按每孔0.1ml依次加入TMB显色工作液，37℃避光反应，反应过程中，要经常的观察，当肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔差别不明显时，即可加入TMB终止液0.1ml/孔。（显色反应*长不要超过30分钟）。
10． 用酶标仪在450nm测定O.D.值。
11． 根据样品的吸光值在坐标上找出对应的浓度。用户也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了N倍，其实际浓度应该×N。
操作程序总结：
准备试剂，样品和标准品
加入准备好的样品和标准品，37℃反应90分钟
洗板2次，加入生物素化抗体工作液，37℃反应60分钟
洗板3次，加入ABC工作液，37℃反应30分钟
洗板5次，加入TMB显色液，37℃反应
加入TMB终止液
30分钟之内读OD值
计算标本待测因子含量
检测范围：1000pg/ml→15.6pg/ml。
敏感性： ＜3pg/ml
特异性： 系统和其它因子无交叉反应。
保存： -20℃ [短期内（如两周）可4℃]
期： 12个月（-20℃）。
用途： 用于体外定量分析液体标本（通用型）。
REFERENCES
1. Dinarello,C.A.（1994）Eur.Cytokine Netw. 5:517.
2. Dinarello, C.A. （1996） Blood 87:2095.
3. March, C.J.et al.（1985） Nature 315:641.
4. Thornberry, N.A.et al.（1992） Nature 356:768.
5. Wewers,M.D.et al.（1997） J. Immunol. 159:5964.
6. da Cunha,A.etal.（1993）J.Neuroimmunol. 42:71.
7. Gonzales-Hernandez, J.A.et al.（1995） Clin. Exp. Immunol. 99:137.
8. Jokhi, P.P.et al.（1997） Cytokine 9:126.
