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从分析柱到制备柱线性放大常用公式
(制备柱内径)2*制备柱柱长
放大倍数=
(分析柱内径)2*分析柱柱长
2、流速放大估算:
(制备柱内径)2
制备流速= 分析流速 *
(分析柱内径)2
流速可用于计算与分析柱应用时完全相当的线性流速条件下对应于更大色谱柱的体积流速。但是,合理的流速将取决于柱规格。当柱长增加、粒径减小时,柱背压会相应增加,会受到液相系统耐压性的限制。
3、梯度持续时间估算:
(制备柱内径)2*制备柱柱长 *分析柱体积流速
梯度持续时间=分析时梯度持续时间 *
(分析柱内径)2*分析柱柱长*制备柱体积流速
4、制备柱上样量预估
对于制备柱的大概上样量(毫克),梯度洗脱模式时:
| 柱内径(mm) | ||||
柱长(mm) | 4.6 | 10 | 19 | 30 | 50 |
30 | - | - | 27 | - | - |
50 | 3 | 15 | 45 | 110 | 310 |
75 | - | - | - | 165 | - |
100 | 5 | 25 | 90 | 225 | 620 |
150 | 8 | 40 | 135 | 335 | 930 |
250 | 13 | 60 | 225 | 560 | 1550 |
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合理的流速(ml/min) | 1.4 | 6.6 | 24 | 60 | 164 |
合理的进样体积(ul) | 20 | 100 | 350 | 880 | 2450 |
合理流速取决于柱内径。随柱长增加及填料粒径减少,柱背压增大。使用时会受到液相设备的难压性的限制。在制备柱上的梯度持续时间,应按照与分析柱应用时相等的梯度洗脱体积与柱体积之比的倍数因子计算。
进样体积数值基于50mm柱长并使用较强溶剂溶解样品时。如增加柱长,进样体积亦可增加,但并不成正比。使用较弱强度的溶剂溶解样品,能显著提高进样量。
制备柱的样品载量受制于许多因素。以上所列数据仅为“平均状况下”的预估值。通常规律有:
1、强保留的目标物载量较大
2、样品简单时载量较大
3、需要高分辨时载量降低
4、样品载量受上样条件影响很大:受限于样品体积或受限于样品溶剂的强度
5、对于肽样品,其载量主要取决于目标肽序列以及肽样品的溶解性,建议按所列至的5-20%预估。
原创作者:赛谱锐思(北京)科技有限公司