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大鼠前列腺素E1,ELISA酶免分析检测试剂盒|ELISA Kit价格
点击次数：162发布时间：2013/5/4 15:51:42
更新日期：2021/11/5 13:13:34
所 在 地：中国大陆
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优质供应
详细内容
大鼠前列腺素E1,ELISA酶免分析检测试剂盒|ELISA Kit价格
样本处理及要求
1.血清-用采血管收集血液，室温血液自然凝固30分钟，1000 xg离心15分钟左右，收集上清，尽早进行实验，或者分装后-20°C 或 -80°C 保存。
2.血浆-收集好的血浆根据要求选择EDTA或者柠檬酸钠作为抗凝剂，2-8°C 1000 xg离心15分钟左右，30分钟内收集好，-20°C 或 -80°C 保存，避免反复冻融。
3.细胞上清及相关液体-收集好的样本离心后应尽快实验，或者分装后-20°C 或 -80°C 保存，避免反复冻融。
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注意事项
1.所有试剂和样本使用前必须在室温下平衡，混匀试剂时不应起泡沫。
2.一旦实验开始，各操作步骤都应尽快完成。
3.避免重复使用手中的吸头和试管，以免交叉污染。
4.一般情况，酶的反应与时间和温度成正比。
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操作步骤
1.标准品的稀释：准备小试管6只，依次编好号码，先在各小试管中加入标准品稀释液100ul，然后取原浓度标准品100ul加入一只已编好号的试管中，充分混匀;再在该试管中取100ul加入第二支试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul加入第三只试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul加入第四只试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul加入第五只试管中，充分混匀；然后在该试管中取100ul，弃掉。第六只试管作为0号标准品。稀释后各管浓度分别是：320 pg/ml,160 pg/ml,80 pg/ml,40 pg/ml,20pg/ml,0 pg/ml。
在酶标包被板上设标准品孔，依次加入不同浓度的标准品50ul（建议每个浓度做2个平行孔）。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品、酶标试剂及生物素标记的抗IL-6抗体，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品40μl，然后再加生物素标记的抗IL-6抗体10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行
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实验结果计算
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，即为样品的实际浓度。
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