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人生长激素释放肽ghrelin（GHRP-Ghrelin）elisa试剂盒使用说明书

实验原理：

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人生长激素释放肽ghrelin（GHRP-Ghrelin）水平。用纯化的人生长激素释放肽ghrelin（GHRP-Ghrelin）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入生长激素释放肽ghrelin（GHRP-Ghrelin），再与HRP标记的生长激素释放肽ghrelin（GHRP-Ghrelin）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的生长激素释放肽ghrelin（GHRP-Ghrelin）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人生长激素释放肽ghrelin（GHRP-Ghrelin）浓度。

目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中生长激素释放肽ghrelin（GHRP-Ghrelin）的含量。

试剂盒组成：

封板膜:2片（48）/2片（96）   

说明书:1份          

密封袋:1个

标准品：   2700ng/L  0.5ml×1瓶   0.5ml×1瓶  2-8℃保存            

酶标包被板:  1×48        1×96             2-8℃保存

样品稀释液: 3ml×1瓶       6 ml×1瓶         2-8℃保存

显色剂A液: 3ml×1瓶       6 ml×1瓶         2-8℃保存

显色剂B液: 3ml×1瓶       6 ml×1瓶         2-8℃保存

终止液:     3ml×1瓶       6ml×1瓶          2-8℃保存

浓缩洗涤液:（20ml×20倍）×1瓶   （20ml×30倍）×1瓶   2-8℃保存

操作步骤

1.         标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在、第二孔中分别加标准品100μl，然后在、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为1800ng/L，1200ng/L ，600ng/L，300ng/L， 150ng/L）。

2.         加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品*终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.         温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.         配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。

5.         洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.         加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.         温育：操作同3。

8.         洗涤：操作同5。

9.         显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

10.     终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.     测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

【人生长激素释放肽ghrelin（GHRP-Ghrelin）elisa试剂盒】注意事项：

1．  试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．  浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．  各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4．  请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请*后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5．  封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．  底物请避光保存。

7．  严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8．  所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．  本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

试剂盒性能：

1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。

2.批内与批见应分别小于9%和11%

检测范围：

0.2IU/L - 6IU/L

产品主页：www.shjlsw.com